目的:糖尿病慢性伤口是糖尿病最常见的并发症之一,已成为世界范围内日益受到关注的健康问题。慢性伤口虽不会像心血管疾病或者癌症一样迅速致人死亡,由于其带来的长期痛苦,严重影响患者的生活质量,加重家庭和社会照护体系的经济负担。因此探讨糖尿病慢性伤口的客观化指标,对降低糖尿病慢性伤口发病率、提高护理技术的科学性、减轻护理工作难度具有重要的理论及临床意义。但目前国内外对于糖尿病慢性伤口的客观指标的研究较少,大多局限于伤口本身,集中于对患者症状和体征的评估。而临床工作中掺杂的主观性会影响护理评估的标准,从而导致不同的护理干预措施。本研究将临床回顾性资料报告与基础实验相结合,筛选糖尿病慢性伤口患者异常变化的实验室检查指标并通过实验加以验证,探讨影响糖尿病慢性伤口的客观化指标,为临床糖尿病慢性伤口的预警与护理提供数据支持。方法:研究将2019年1月至2020年2月在某人民医院住院的符合纳入标准的83例糖尿病患者作为研究对象,根据是否患有糖尿病慢性伤口分为2组:糖尿病慢性伤口组和糖尿病非慢性伤口组。收集患者一般资料和血液检查指标并进行统计学分析,筛选糖尿病慢性伤口发生发展过程中的危险因素。选用6-8周龄的C57BL/6J小鼠,验证临床发现的独立危险因素,在动物体内与慢性伤口愈合间的关系,以及危险因素影响伤口愈合的机制。建立糖尿病慢性伤口小鼠模型,使用圆柱形磁铁,将小鼠背部皮肤(包括表皮、真皮和皮下组织)保护夹持8小时,随后放松16小时。此过程重复两次,以达到模拟缺血再灌注损伤的效果。注射促进伤口愈合的化合物作为阳性对照组,注射溶媒作为阴性对照组(n=8)。观察小鼠耳廓微循环、末梢神经反射以及伤口愈合情况;测定血清左旋精氨酸水平;制备伤口皮肤组织病理学切片,观察伤口愈合变化;分离提取蛋白,利用蛋白印迹法测定内皮细胞迁移通路相关蛋白表达。为了进一步验证上述危险因素,我们构建了人微血管细胞(HMEC-1)高糖损伤模型,同样采用促进伤口愈合的化合物作为阳性对照,分为4组:对照组、高糖组、对照给药组和高糖给药组。观察细胞增殖和迁移情况,检测细胞迁移通路相关蛋白的变化和细胞左旋精氨酸分泌水平。随后外源性的给予左旋精氨酸孵育,观察左旋精氨酸对于内皮细胞的增殖和迁移的影响。结果:(1)T检验结果发现糖尿病慢性伤口患者血清左旋精氨酸水平(P=0.001)、总血红蛋白水平(P=0.002)明显低于糖尿病非慢性伤口患者,而白细胞计数(P=0.001)、TCHO(P=0.017)、TG(P=0.001)、LDL-C(P=0.015)、空腹血糖(P=0.001)和糖化血红蛋白水平(P=0.001)明显高于糖尿病非慢性伤口患者。因子分析和二元Logistic回归分析结果表明患者血糖控制不佳、白细胞计数升高和血清左旋精氨酸水平降低(P=0.006)是糖尿病慢性伤口发生的独立危险因素。(2)动物实验结果显示,在同等压力刺激下糖尿病小鼠比健康小鼠出现了更严重的皮肤溃疡(P<0.05)。糖尿病慢性伤口组中,血清左旋精氨酸和一氧化氮的水平下降,伤口血管内皮细胞迁移相关通路活性受到抑制(P<0.05)。微循环观测结果显示,与正常组小鼠相比,慢性伤口组小鼠耳廓微血管密度明显降低(0<0.05),微动脉和微静脉管径变窄(0<0.05)。(3)细胞实验结果显示,高糖能够抑制HMEC-1细胞的增殖和迁移,并降低细胞左旋精氨酸的分泌水平。蛋白印迹实验表明,HMEC-1细胞迁移相关通路的活化也因高糖处理而降低。高糖刺激下,HMEC-1细胞中迁移相关蛋白FOXP2 mRNA的表达显著降低。下调FOXP2的表达则会引起一氧化氮产生降低。进一步外源性左旋精氨酸孵育可促进HMEC-1细胞的增殖、迁移和一氧化氮的产生。结论:临床数据分析表明,较差的血糖控制水平和血清左旋精氨酸水平降低是糖尿病慢性伤口发生的危险因素。在细胞和动物上的实验结果也为左旋精氨酸作为糖尿病慢性伤口客观化指标提供了依据,并对其促进慢性伤口愈合的机制进行初步的探讨。本研究为糖尿病慢性伤口的临床护理评估提供了客观的潜在的指标。