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背景:宫颈癌是威胁女性健康主要的恶性肿瘤之一,但与其他绝大多数恶性肿瘤不同,宫颈癌有明确的病因,即高危型人乳头瘤病毒（HPV）持续感染,主要是HPV16和HPV18感染。大多数HPV感染都是一过性的、短暂的,而由病毒感染到进展为宫颈癌,还需经过宫颈上皮内瘤变（CIN）阶段,这为检测早期癌前病变,防止进展为宫颈癌提供了可能。宫颈病变的治疗主要基于阴道镜下宫颈活检的病理结果,但阴道镜活检由于检查者主观限制以及难以评估宫颈管内的病变等诸多原因,导致活检结果与术后病理结果存在差异。另外,部分宫颈高级别鳞状上皮内病变（HSIL）的患者,疾病存在自发逆转可能,临床上对该部分患者是否需要进行手术治疗仍存在争议,年轻患者因对病变进展的恐慌而选择宫颈锥形切除术,导致其存在妊娠不良结局的风险。因此,探求一种能够提高阴道镜下宫颈活检的准确性、识别宫颈病变进展风险的工具有着重要的临床意义。DNA异常甲基化与肿瘤的发生与发展密切相关。研究表明,DNA甲基化检测在肿瘤早期诊断具有广阔的应用前景。国外学者经全基因组CpG岛微阵列及甲基化特异性PCR验证,筛选出高灵敏度及特异度的6个宫颈癌标志物（ASTN1,DLX1,ITGA4,RXFP3,SOX17,ZNF671）。国内外已有研究证实此甲基化组合检测在宫颈癌筛查中具有高敏感性和特异性。但国内外对于将此甲基化组合检测应用于提高宫颈活检病理诊断的准确性以及预测宫颈病变进展风险方面,仍缺乏明确的研究。目的:检测宫颈脱落细胞中相关基因（ASTN1、DLX1、ITGA4、RXFP3、SOX17和ZNF671）的甲基化程度,探讨其提高宫颈活检对病理诊断的准确性,以及预测宫颈病变进展风险的潜力。方法:比较山东大学齐鲁医院144例患者阴道镜下宫颈活检病理与宫颈组织切除术后病理的符合率、诊断不足率及诊断过度率。采用甲基化特异性PCR检测患者宫颈脱落细胞中相关基因的甲基化情况,对比阴道镜下宫颈活检病理诊断不足与诊断过度患者的甲基化阳性率。按照年龄分为年轻组（≤5岁,n=56）和年长组（＞35岁,n=88）;根据术后病理结果分为宫颈癌（CC）组（n=41）,CIN3 组（n=34）,CIN2 组（n=33）,CIN1 组（n=24）,宫颈炎组（CIN0,n=12）;按照HPV结果分为HPV β阳性组（包括HPV16/18阳性组85例、非HPV16/18阳性组36例、HC2阳性10例、E6E7阳性3例,n=134）、HPV阴性组（n=7）和HPV未测组（n=3）;按照TCT结果分为细胞学低风险组（包括NILM 21例、ASCUS 26例、LSIL 20例,n=67）,细胞学高风险组（包括ASC-H 15例、HSIL 31例,n=46）和其他组（如TCT未测等,n=31）。我们比较144例宫颈病变患者不同临床因素下相关基因甲基化阳性率的差异,分析甲基化对于CIN2+和CIN3+的诊断效能。检验标准α=0.05,当P＜0.05时认为差异有统计学意义。结果:1、以术后病理为标准,阴道镜引导下宫颈组织活检病理与术后病理的符合率为55.9%（71/127）,诊断不足率为17.3%（22/127）,诊断过度率为26.8%（34/127）。阴道镜下活检不同病理级别与术后病理的符合率分别为:CIN1（7/10,70.0%）、CIN2（18/39,46.2%）、CIN3（21/49,42.9%）、CC（25/29,86.2%）,差异有统计学意义（P＜0.05）。比较年轻组与年长组的阴道镜活检与术后病理的符合率（56.8%vs 54.7%）,差异无明显统计学意义（P均＞0.05）。HPV16/18阳性组的阴道镜活检与术后病理的符合率高于非HPV16/18 组（62.3%vs 38.7%）,差异有统计学意义（P＜0.05）。2、活检病理结果为CIN2及CIN3的患者,与术后病理相比,诊断过度患者的甲基化阳性率明显低于诊断不足患者的甲基化阳性率（0%vs 66.7%,33.3%vs 92.3%）,差异具有统计学意义（P＜0.05）。3、对于总样本,甲基化阳性率在CC、HSIL、LSIL-组中分别为97.6%、50.7%、8.3%,随着病理级别的升高,甲基化阳性率明显升高,差异具有统计学意义（P＜0.05）,两两之间比较差异具有统计学意义（P均＜0.005）。HPV16/18阳性组甲基化阳性率63.5%高于非HPV16/18组（30.1%）,差异具有统计学意义（P＜0.05）。细胞学高危组甲基化阳性率高于低危组（69.6%vs 32.8%）,差异具有统计学意义（P＜0.05）。对于病理结果为CIN3+的患者,年轻组的甲基化阳性率（77.8%）低于年长组（95.8%）,差异存在统计学意义（P＜0.05）。4、甲基化检测对CIN3+/CIN2-、CIN3+/CIN1-及CIN2+/CIN1-具有良好的鉴别能力,敏感度及特异性较高（89.3%、85.5%,89.3%、91.7%,69.7%、91.7%）。甲基化阳性对于年长组CIN3+/CIN2-、CIN3+/CIN1-、CIN2+/CIN1-具有更高的敏感度及特异度（95.8%、87.5%,95.8%、95.0%,73.5%、95.0%）。5、阴道镜下活检病理与术后病理CIN3+的总符合率（即阴道镜活检诊断术后病理为CIN3+的灵敏度）为89.4%,特异性为69.4%;甲基化检测对于诊断术后病理CIN3+的灵敏度为90.9%,特异性为85.5%;阴道镜下活检联合甲基化检测对于诊断术后病理CIN3+的灵敏度为97.0%,特异性为64.5%。阴道镜下活检联合甲基化检测CIN3+的灵敏度（97.0%）高于阴道镜下宫颈活检的灵敏度（89.4%）,差异无统计学意义（P＞0.05）。甲基化组合检测的特异度高于阴道镜下宫颈活检,差异有统计学意义（P＜0.05）。6、对HPV 阳性且活检为CIN1+的患者进行分析,宿主多基因甲基化检测CIN3+的灵敏度为88.9%,虽然略低于细胞学及HPV16/18分型联合细胞学（92.6%,100%）,但其特异性远远高于细胞学及HPV分型联合细胞学（89.4%vs 22.5%,10.6%）。7、就单个基因来说,各基因阳性率随着病理级别的加重均呈上升趋势（P均＜0.001）。其中,ZNF671鉴别CIN3+/CIN2-的特异度为85.5%,灵敏度高达84.0%,约登指数为0.668。ZNF671单基因与宿主多基因甲基化组合检测CIN3+的灵敏度（84.0%vs 89.3%）及特异性（85.5%vs 85.5%）相比,无统计学差异（P＞0.05）。结论:1、阴道镜引导下宫颈活检病理与术后病理的符合率与年龄无关,但与HPV16/18分型相关。2、活检病理结果为HSIL的患者,诊断过度患者的甲基化阳性率明显低于诊断不足患者。3、随着病理级别的升高,甲基化阳性率明显升高。甲基化检测预测术后病理CIN3+的灵敏度与特异度均较高,尤其在年长女性患者中。4、对于阴道镜下宫颈活检的患者,联合甲基化检测,能够一定程度提高预测术后CIN3+的灵敏度,并明显提高特异度。5、就单个基因来说,ZNF671检测CIN3+的特异度与灵敏度与宿主多基因甲基化组合相当,有检测简单及花费低的优势。6、宿主多基因甲基化检测是一种预测癌前病变进展风险的潜在生物学标记,但尚需前瞻性观察研究证实。