【摘 要】
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背景:三阴性乳腺癌因缺少雌激素受体（estrogen receptor,ER）、孕激素受体（progesterone receptor,PR）和表皮生长因子受体（human epidermal growth factor receptor 2,HER-2）等分子的表达,所以内分泌和靶向药物疗效较差,目前主要的治疗手段为化疗。但三阴性乳腺癌常出现化疗耐药而导致患者预后变差,故对其耐药性的机制研究十分
【基金项目】
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国家自然科学基金（81572760）；
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背景:三阴性乳腺癌因缺少雌激素受体（estrogen receptor,ER）、孕激素受体（progesterone receptor,PR）和表皮生长因子受体（human epidermal growth factor receptor 2,HER-2）等分子的表达,所以内分泌和靶向药物疗效较差,目前主要的治疗手段为化疗。但三阴性乳腺癌常出现化疗耐药而导致患者预后变差,故对其耐药性的机制研究十分重要。miRNA是一类长度为18～22 nt的小分子RNA,可以靶向m RNA3’非翻译区而抑制基因的表达。有研究证明乳腺癌中抑癌基因肿瘤高甲基化基因1（hypermethylated in cancer 1,HIC1）表达被抑制与乳腺癌耐药性相关,本课题使用生物信息学预测,miR-9-5p可能靶向抑制HIC1的表达。因此,本研究将针对三阴性乳腺癌细胞中miR-9-5p及其靶基因HIC1的关系进行研究,并探究miR-9-5p/HIC1调控轴对阿霉素耐药性的影响。目的:研究miR-9-5p对三阴性乳腺癌生物学行为的影响及其分子机制。方法:1、应用生物信息学预测可靶向调控HIC1的miRNA。2、对比miR-9-5p在正常乳腺上皮细胞MCF-10A和三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的基础表达。3、应用miR-9-5p过表达和敲低慢病毒转染MDA-MB-231,并利用Real-time PCR检测miR-9-5p表达情况,确定转染效率。4、应用CCK-8和流式细胞仪检测阿霉素诱导对miR-9-5p稳定表达细胞株细胞活性和凋亡的影响。5、应用双荧光素酶报告基因系统,Real-time PCR和蛋白免疫印迹试验验证miR-9-5p与HIC1的关系以及miR-9-5p对HIC1 m RNA和蛋白的影响。6、在miR-9-5p敲低细胞中转染HIC1的si RNA,检测HIC1 m RNA和蛋白的表达变化,并检测阿霉素诱导对细胞活性和凋亡的影响。结果:1、生物信息学分析表明miR-9-5p可靶向HIC1,miR-9-5p在MDA-MB-231细胞中的表达明显高于MCF-10A细胞。2、miR-9-5p过表达和敲低慢病毒可明显上调或下调其表达,随后应用阿霉素诱导,过表达miR-9-5p可提高细胞活性和减少凋亡,敲低miR-9-5p可降低细胞活性和促进凋亡。3、双荧光素酶报告基因结果显示miR-9-5p可抑制HIC1 3’UTR质粒的荧光,并且miR-9-5p与HIC1 m RNA和蛋白的表达呈负相关。4、在miR-9-5p抑制细胞中应用si RNA可明显下调HIC1的表达,并可以提高细胞活性和减少凋亡。结论:1、miR-9-5p在三阴性乳腺癌中表达升高,可增强细胞对于阿霉素的耐药性。2、miR-9-5p可靶向调控HIC1的3’非翻译区,并通过抑制HIC1的表达影响细胞对阿霉素的耐药性。
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