阿尔茨海默症（Alzheimer’s disease,AD）是一种以学习、认知和记忆障碍等为特征的神经退行性疾病。目前,选择乙酰胆碱酯酶（Acetylcholinesterase,AChE）抑制剂来治疗这种疾病是首要的。临床应用的AChE抑制剂有副作用、毒性,且生物利用率低等缺点。因此,进一步寻找新型的、效率高的、毒性较低的AChE抑制剂是研究的热点之一。天然中草药多种多样,在治疗疾病时表现出毒性小且副作用小,所以,研究者们越来越关注天然药物。连翘是一种天然中草药,目前已经从动物实验研究了连翘酯苷A对AD动物模型的学习记忆有改善作用,但尚未阐明连翘及其主要成分是否可以影响胆碱能系统发挥神经保护效应。针对上面提到的问题,本论文选取连翘为研究对象,首先,从化学的角度出发,采用Ellman法,筛选连翘及其主要成分对AChE的抑酶活性。采用分子对接技术和多种光谱技术研究连翘酯苷A或芦丁与AChE的相互作用机制,比较两种化合物对AChE作用的强弱;其次,从生物的角度出发,以PC12细胞为研究模型,进一步研究连翘酯苷A对Aβ诱导的细胞凋亡的神经保护作用。主要研究内容和结果如下:1、连翘（青翘）及其主要成分对AChE抑制作用的研究。我们采用Ellman法,研究连翘及其主要成分对AChE酶活性的影响,通过IC₅₀值比较抑酶能力的大小。结果表明:20%乙醇洗脱物对AChE的抑制作用强于40%乙醇洗脱物对AChE的抑制和60%乙醇洗脱物对AChE的抑制作用;而水洗,80%乙醇洗脱物和95%乙醇洗脱物对AChE都没有抑制作用;液相分析得出,20%乙醇洗脱物中连翘酯苷A的峰面积占比较大,为68.9%,所以,推测连翘酯苷A可能是其中的一种有效作用成分。而连翘四种主要成分对AChE活性均有一定的抑制作用,通过IC₅₀值的比较,最终得出连翘酯苷A对AChE的抑制作用最强。敲除实验确定连翘酯苷A是20%乙醇洗脱物中的一种有效作用成分。动力学实验表明连翘酯苷A对AChE的抑制是混合型抑制,抑制常数为47.68μM。2、连翘酯苷A或芦丁与AChE的相互作用研究。采用光谱法和分子对接技术对猝灭机制、结合常数、结合位点以及结合距离等研究。结果表明:连翘酯苷A或芦丁与AChE相互作用,引起AChE荧光完全猝灭,猝灭机制主要为形成复合物的静态猝灭;两者与AChE均以1:1结合;范德华力、氢键以及疏水作用力是两者与AChE作用的主要作用力;分子对接技术进一步验证其相互作用力;FRET研究表明两者与AChE间的结合距离均小于7 nm。两种化合物也表现出不同的性质:在测试温度下,芦丁的结合常数K较小,芦丁与AChE的相互作用比连翘酯苷A弱。连翘酯苷A表现出较强的相互作用和猝灭作用,其作用于AChE的结合常数K稍大。根据分子模拟对接软件显示的Total_Score的比较,得出连翘酯苷A与AChE的作用能力强于芦丁。这些实验结果有力地证明连翘酯苷A对AChE有较强的荧光猝灭作用,并具有较高的亲和力。3、连翘酯苷A通过下调乙酰胆碱酯酶对Aβ_25-35诱导的细胞凋亡的保护作用研究。主要采用MTT法,ELISA试剂盒检测,Hoechst33258染色,流式细胞术,Western blot法进行研究。结果表明,连翘酯苷A对Aβ_25-35引起的细胞存活率的降低,AChE活力和表达的增加以及细胞凋亡都有改善作用。实验证实连翘酯苷A可以通过下调AChE对Aβ_25-35诱导的PC12细胞凋亡起到保护作用,这一发现使连翘酯苷A成为一种新的医治AD的潜在药物。