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目的乙烷硒啉(ethaselen)是一种新型苯并异硒唑酮类有机硒小分子化合物,是靶向硫氧还原蛋白还原酶设计合成的新型抗肿瘤化合物。本研究课题的实验内容主要是对乙烷硒啉在36例临床肿瘤患者体内的药物代谢和动力学进行研究,阐明受试者口服乙烷硒啉分散片后体内的含硒化合物变化,为乙烷硒啉临床血药浓度监测、临床合理用药、活性代谢产物的研究以及药代动力学研究提供参考数据。方法采用湿法消解结合ICP-MS的方法对临床受试者血浆和尿液样品进行处理,用ICP-MS方法测定血浆中给药后不同时间含硒药物总量来表征样品中乙烷硒啉的浓度,WinNonlin软件计算主要药代动力学参数;求算受试者口服不同剂量乙烷硒啉分散片后由肾脏排出的总硒含量占给药的含硒量百分数。应用超高效液相色谱-电喷雾-串联四级杆飞行时间质谱(Ultra performance liquid chromatography electrospray ionization quadrupole time of flight mass spectrometry,UPLC-ESI-QTOF)联用技术寻找和确证肿瘤患者口服乙烷硒啉后血浆和尿液中原形药物和代谢产物,比较原形药物和代谢产物在血浆和尿液中的种类和含量差异。结果采用ICP-MS法测定乙烷硒啉分散片Ⅰ期临床试验患者单次、连续口服给药后血浆和尿液样品中含硒化合物的浓度。乙烷硒啉血药浓度在1～1000ng·mL-1范围内线性关系良好(γ≥0.99),定量下限为lng·mL-1。本实验采用单因素方差分析计算方法批内和批间精密度,准确度采用相对误差(RE%)表示。测定乙烷硒啉(浓度分别为2、100和1000ng·mL-1)的相对误差(±RE%)为0.3%～3.3%;批内精密度(RSD%)为2.6%～6.1%;批间精密度(RSD%)为3.4%～14.1%;在线混合内标在每一分析批样品测定时,内标的绝对响应值的偏差均不超过校准空白中最初响应的80-120%。本实验建立的ICP-MS法不仅能满足乙烷硒啉在人体血浆中的药代动力学研究,同样适用于人体尿液样品的排泄研究。乙烷硒啉Ⅰ期临床试验中癌症受试者单次/连续(Qd)口服乙烷硒啉分散片,剂量分别为 180,360,600,900,1200 和 1590 mg’day-1,用非房室模型计算血浆中硒的药代动力学参数。由于药物在体内滞留时间较长,没有明显的消除相,因此没有计算和提供与消除速率有关的参数。单次给药各剂量组达峰时间tmax依次是 8.7±4.2h、5.3±2.3h、9.2±1.1 h、6.8±1.79h、8.7±2.1h 和 6.7±3.1 h;达峰浓度C ax之比约为 1:1.7:2.6:2.9:3.6:3.7;AUC0-48之比约为 1:1.6:2.5:2.8:3.2:3.2,给药剂量之比为 1:2:3.3:5:6.7:8.8,提示随给药剂量增加机体对药物有吸收饱和现象。连续给药各剂量组末次给药和单次给药相比AUC0-48的差别具有统计学意义(P<0.05),末次给药后明显增加,提示连续给药后体内药物有积蓄,末次给药的平均AUC是首次给药的2.0-3.4倍。乙烷硒啉Ⅰ期临床试验中癌症受试者连续口服乙烷硒啉分散片(600、900和1350 mg/次,一天两次),峰浓度和药时曲线下面积基本随服药剂量的增加而增大,900 mg趋于饱和;第7次给药后明显高于第1次给药,多次连续给药后有积蓄;第14次与第7次给药后基本相同,说明血药浓度达到稳态水平,吸收量和排出量达到平衡,血药浓度没有持续增加也提示药物不会产生蓄积毒性。用ICP-MS法对临床受试者口服乙烷硒啉分散片后肾脏排泄情况进行研究,结果表明在12 h的尿液样品收集时间里,经肾脏排出的含硒量占总给药含硒量的0.59%～1.51%,提示药物在受试者体内尚未消除完全;同时发现受试者个体差异较大,对于药物的吸收和排泄存在较大的差异。采用UPLC-QTOF法对受试者口服乙烷硒啉分散片后部分血浆和尿液样品进行MSE质谱分析,所得质谱信息和空白基质样品对比分析。结果表明,受试者口服乙烷硒啉分散片后,乙烷硒啉在体内迅速代谢,血浆和尿液中均未发现乙烷硒啉原形药物,乙烷硒啉在人体内可能存在的开环代谢产物包括:甲基化、羟基化、葡萄糖醛酸化等代谢产物,其中血浆样品中含量较多的是乙烷硒啉在体内发生甲基化和羟基化产物,尿液样品中存在较多的是甲基化和葡萄糖醛酸化产物。结论本研究用经可靠性验证的湿法消解-ICP-MS法对人体血浆和尿液中含硒化合物进行测定,该方法简便、快速、灵敏、适用于乙烷硒啉分散片的药代动力学性质进行研究,同时为乙烷硒啉药物的临床监测提供了参考依据。采用UPLC-QTOF法对人体血浆和不同时间段收集的尿液样品进行测定,根据乙烷硒啉和相关代谢产物的质谱、色谱信息,对血浆和尿液中发现的含硒化合物进行初步的结构解析。结果显示,血浆和尿液样品中均发现未检出乙烷硒啉原形药物,样品中存在乙烷硒啉氧化、甲基化和葡萄糖醛酸化等代谢产物。实验结果为乙烷硒啉体内的代谢转化和活性代谢产物的寻找奠定了基础。