论文部分内容阅读
第一部分：脂氧素A4通过调控SOCS2/TRAF6抑制脂多糖诱导的人角质形成细胞炎性因子的释放目的：研究脂氧素A4(LXA4)对脂多糖诱导的人角质形成细胞分泌细胞因子和趋化因子的作用效应及其可能上游机制。方法：分离培养正常人表皮角质形成细胞,首先逆转录PCR检测TLR4、脂氧素受体(ALXR)和芳香烃受体(AhR)在人角质形成细胞上的表达情况；实验分为三组：对照组.LPS(10ug/ml)组及LXA4(100nmol/L)+LPS组,分别作用相应的时间后,实时荧光定量PCR和ELISA分别从mRNA水平和蛋白水平检测各组角质形成细胞不同时间点TNF-a和IL-1β的表达量;实时荧光定量PCR和蛋白质印迹试验分别从mRNA水平和蛋白水平检测各组角质形成细胞SOCS2和TRAF6的表达；蛋白质印迹试验检测各组细胞细胞核中核转录因子NF.kB的表达量。结果：人角质形成细胞表达TLR4、脂氧素受体及芳香烃受体；从mRNA水平和蛋白水平,LXA4明显抑制LPS刺激诱导的TNF-a、IL-1β及TRAF6在角质形成细胞中的高表达,上调LPS干预下SOCS2的低表达；LXA4抑制LPS诱导的角质形成细胞中NF-κB的核转位。结论：LXA4可能通过上调SOCS2降解TRAF6抑制脂多糖刺激诱导的角质形成细胞TNF-a和IL-1p的表达。第二部分：脂氧素A4通过ERK/NF-kB信号通路抑制人角质形成细胞增殖及炎性因子/趋化因子的释放目的：研究在未激活及脂多糖刺激活化下的人角质形成细胞中,LXA4对细胞增殖和分泌炎性细胞因子及趋化因子的作用,探寻LXA4对角质形成细胞细胞周期和下游抗炎信号通路的机制研究。方法：实验分为四组,对照组、LXA4组(100noml/L)、LPS组(10ug/ml)和LXA4+LPS组。用WST-8和CFSE细胞示踪法检测细胞增殖及DNA染色流式细胞术检测细胞周期；实时荧光定量PCR和ELISA分别从mRNA水平和蛋白水平检测各组角质形成细胞细胞炎性因子和趋化因子的表达；实时荧光定量PCR和蛋白质印迹试验分别从mRNA水平和蛋白水平检测cyclin D1和p16INK4A的表达；蛋白质印迹试验检测ERK1/2和核转录因子NF-kB的表达量。结果：对未激活及脂多糖刺激活化下的人角质形成细胞,LXA4抑制其细胞增殖及炎症细胞因子/趋化因子的释放；对角质形成细胞造成细胞周期G0/G1期阻滞；细胞周期蛋白cyclin D1的表达被LXA4抑制,同时促进p16INK4A分子的表达；ERK1/2的磷酸化和NF-kB-p65的核转位都被LXA4所抑制。结论：LXA4能抑制未激活及脂多糖刺激活化下人角质形成细胞增殖和细胞炎性因子的释放,这种效应可能是通过干预信号分子cyclin D1/P16INK4A. ERK1/2和NF-kB实现的。第三部分：脂氧素A4腹腔注射改善咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损目的：观察LXA4对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病模型的干预作用。方法：30只雌性Balb/C小鼠,随机等分为正常对照组、模型组及LXA4组。采应用银屑病皮损面积和疾病严重程度评分标准(psoriasisarea and severity index, PASI)观测各组模型小鼠皮损变化；光镜下测量表皮层厚度；光镜下观察皮损组织形态学变化;采用流式细胞术检测各组小鼠脾脏细胞CD4+T细胞中Th1及Th17细胞的分化差异。结果：模型组小鼠背部皮肤出现红斑、鳞屑及皮损增厚;皮损组织病理表现为角化不全、中性粒细胞微脓肿及表皮棘层增厚；真皮大量炎症细胞浸润,脾脏Th17细胞比例上升。与模型组比较,LXA4组小鼠银屑病样皮损红斑、鳞屑及增厚症状缓解,PASI分数降低,表皮厚度显著降低,皮损中性粒细胞微脓疡基本消退,角质形成细胞增殖明显减轻,真皮浅层炎症细胞浸润减少,脾脏Th17细胞比例下调。结论：LXA4能通过促中性粒细胞消退、抑制表皮细胞过度增殖及调节T淋巴细胞分化改善咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损。