羊胎盘含有多种生物活性物质,具有抗氧化、降血糖、抗菌抗病毒和提高机体免疫力等多种生理功效。我国羊胎盘资源丰富,但是对羊胎盘的利用率不足3%,因此,以羊胎盘为原料进行综合开发利用具有积极的现实意义和广阔的市场前景。本文以羊胎盘提取残留物高质化利用为目的,首先对提取水溶性物质后的羊胎盘残余物进行营养价值分析,然后采用产蛋白酶微生物黑曲霉、米曲霉、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌对其进行发酵酶解并对产物的生物活性进行研究,得到了抗氧化和免疫活性肽的最佳制备工艺并对产物的稳定性和各组分的含量与活性进行研究。主要结果如下:(1)羊胎盘提取水溶性物质后的残余物进行营养价值分析:羊胎盘提取残余物是一种优质的蛋白,其蛋白质功效比(PER值)为1.27,干基总蛋白含量为97.67%,其中氨基酸含量依次为:谷氨酸(10.24%)、甘氨酸(9.51%)、天门冬氨酸(6.56%)、精氨酸(5.65%)、亮氨酸(5.46%)、脯氨酸(5.41%)。氨基酸组成合理,其第一限制性氨基酸为异亮氨酸和缬氨酸,两者的氨基酸评分均为0.71。(2)采用4种产蛋白酶微生物发酵羊胎盘提取残余物制备具有抗氧化和免疫增殖活性的酶解产物。结果表明,四种微生物在各自适宜的发酵温度和发酵pH条件下以黑曲霉的多肽产率29.67%最多,依次是枯草芽孢杆菌27.58%,地衣芽孢杆菌26.04%,米曲霉24.3%;考察产物的生物活性,其中以黑曲霉发酵产物的抗氧化活性最高,枯草芽孢杆菌发酵产物的免疫细胞增殖活性最高。(3)黑曲霉发酵酶解羊胎盘提取残留物制备抗氧化肽的最优工艺条件为:接种量5%、发酵温度30℃、料液pH 5.6、碳源2.8%、发酵时间76.4 h,所得的发酵液DPPH·清除率83.78%,多肽得率为30.90%;枯草芽孢杆菌发酵羊胎盘提取残留物制备免疫活性肽的最优工艺即料液发酵温度37℃、pH 5.4、碳源1.7%、发酵时间43.5h,进行验证试验,测得酶解产物的刺激指数达到了24.38%,多肽得率27.89%。(4)研究发酵产物多肽的活性和体外的稳定性,分别研究了产物的量效关系,pH值的影响,干燥方式、体外模拟消化。抗氧化肽的自由基清除率随着浓度的升高逐渐增大,相同浓度下对自由基的清除能力要稍高于(谷胱甘肽)GSH的清除能力。免疫活性肽蛋白浓度在6.25-200μg/mL范围内对小鼠脾脏淋巴细胞具有明显的增殖作用,在低于100μg/mL浓度时,随着发酵液蛋白浓度的增加,刺激指数随之增加,在浓度100μg/mL浓度时淋巴细胞的增殖率达到23.25%。抗氧化肽在pH5-8范围内,活性较稳定,过酸或者过碱的环境中产物活性下降;干燥方法对产物的活性没有产生太大影响,黑曲霉酶解产物的活性保持分别为97.6%和91.7%,对枯草芽孢杆菌酶解产物免疫保持90%以上。模拟胃液、肠液中,发酵酶解产物的抗氧化活性保持率优于免疫活性;当胃液消化150 min时,产物对DPPH·清除率为50.88%,对·OH清除率为50.39%,其活性保持率分别为64.45%和58.46%;当肠液消化300 min时,其清除率保持分别为53.87%和63.18%,活性保持率分别为68.28%和73.13%,模拟胃液和肠液消化中免疫活性保持活性保持了44.61%和52.89%。(5)以抗氧化性和体外免疫性为考察指标,对产物各超滤组分的体外生物活性进行了分析探究。结果表明,具有较高抗氧化能力的组分YT-Ⅰ(<3 KDa)、YT-Ⅱ(3 KDa-10 KDa)占黑曲霉发酵酶解蛋白总量的61.4%超过50%,可见分子量少于10 kDa的低分子蛋白组分对羊胎盘提取残余物的抗氧化活性起着主要的贡献,多肽含量分布满足函数关系方程的曲线y=0.0006X2-0.0932X+3.1345;枯草芽孢杆菌的发酵酶解组分中MT-Ⅰ(<3 KDa)、MT-Ⅱ(3 KDa-10 KDa)占总量的85%,MT-Ⅱ(3 KDa-10 KDa)对酶解产物的免疫增殖能力起到重要作用,MT-Ⅰ(<3 KDa)具有较高的抗氧化活性,MT-Ⅱ(3 KDa-10 KDa)与MT-Ⅰ(<3KDa)在免疫细胞增殖方面具有一定的协同增殖效应。