【摘 要】
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异源三聚体GTP结合蛋白(Heterotrimeric GTP binding protein)(以下简称G蛋白)是广泛存在于真核生物的重要跨膜信号转导分子,由Gα、Gβ和Gγ三个亚基组成。在拟南芥研究中发现Gβ亚基只有一个编码基因,AGB1,并发现G蛋白β亚基agb1突变体表现出对多种病原体的敏感性增强,说明AGB1基因对植物的免疫防御反应非常重要,但AGB1在大豆防御中的作用尚不清楚。大豆是四
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异源三聚体GTP结合蛋白(Heterotrimeric GTP binding protein)(以下简称G蛋白)是广泛存在于真核生物的重要跨膜信号转导分子,由Gα、Gβ和Gγ三个亚基组成。在拟南芥研究中发现Gβ亚基只有一个编码基因,AGB1,并发现G蛋白β亚基agb1突变体表现出对多种病原体的敏感性增强,说明AGB1基因对植物的免疫防御反应非常重要,但AGB1在大豆防御中的作用尚不清楚。大豆是四倍体植物,用传统筛选突变体的方法不适用于研究大豆的基因功能,菜豆豆荚斑驳病毒(Bean pod mottle virus,BPMV)诱导基因沉默(BPMV-VIGS)系统,已成功地用于大豆基因沉默并克服了大豆基因功能冗余的问题。通过生物信息学分析,我们在大豆中找到了四个GmAGB1同源基因,它们之间同源率为86-97%。我们从这四个基因的高同源区段选取354bp片段构建了BPMV-GmAGB1沉默载体,期望同时沉默四个基因。BPMV-GmAGB1沉默植物出现植株矮化表型,说明GmAGB1可能影响大豆的正常生长发育;在大豆抗病性鉴定结果中发现,沉默GmAGB1导致大豆对大豆斑疹病菌(Xanthomonas campestris pv,glycines,Xag)的抗性降低,说明GmAGB1对细菌Xag的抗性起正调控的作用;植物细胞应对病原物侵染,可诱导产生过量ROS(Reactive oxygen species),是植物抗病性的重要策略之一。在大豆斑点病菌(Pseudomonas syringae pv.glycinea,Psg)的侵染条件下,GmAGB1沉默株叶片上ROS的积累水平显著低于空载体对照株叶片上的积累水平,说明GmAGB1是细菌诱导ROS产生所必需的;GmAGB1沉默株的抗病性降低可能与细菌侵染诱导的ROS积累量降低有关;MAPK激酶分析表明,应对细菌中保守的鞭毛蛋白N端22个氨基酸小肽flg22处理,Gm MPK3/6激酶激活程度在GmAGB1沉默植株与空载体对照株中未有显著差异,说明GmAGB1不参与Gm MPK3/6的激活;酵母双杂交实验证明大豆中的GmAGB1与Gm AGG1存在互作。
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