结核病是由结核分枝杆菌引起的一种慢性传染病。根据世界卫生组织全球结核病报告显示,目前每年新发现的结核病例就达到了 1000万。结核分枝杆菌可以侵入人体多种内脏器官,由于结核病患者对药物的长期依赖,造成结核分枝杆菌发生变异产生耐药性,给结核病的治疗带来更大的困难。因此,加强结核病的基础研究,尤其是其致病性研究,对结核病的诊断和治疗显得尤为重要。CRISPR/Cas系统是原核生物中存在的一种获得性免疫机制,其不但可以防止自身被外源基因入侵,并且还可以进一步影响病原菌毒力。本研究主要对结核分枝杆菌CRISPR/Cas系统中的Cas6蛋白在诱导巨噬细胞凋亡过程中的作用进行了系统研究。Cas6作为CRISPR/Cas系统中非常重要的组分,为了研究结核分枝杆菌Cas6蛋白对毒力的影响,本研究构建了 Cas6-MBP细菌表达载体,通过Western blot对表达纯化后的Cas6-MBP融合蛋白进行验证正确后,用Cas6-MBP融合蛋白侵染巨噬细胞。结果发现Cas6蛋白对结核分枝杆菌的毒力具有重要作用,其可以引起巨噬细胞凋亡。为了探究Cas6蛋白引起巨噬细胞凋亡的通路,本研究分析了Cas6蛋白在巨噬细胞内定位情况。将构建好的Cas6哺乳动物细胞表达定位载体转染至巨噬细胞,观察其荧光信号,发现Cas6蛋白主要定位于巨噬细胞的细胞质中。本研究进一步通过Pull-down实验,鉴定了巨噬细胞中能够与Cas6互作的膜蛋白和胞质蛋白。结果发现巨噬细胞质存在能与Cas6进行互作的蛋白;进一步通过质谱分析鉴定,发现在巨噬细胞中,能与Cas6互作的胞质蛋白有4个,包括GRP78、ERP44、IF4A3和2AAA,其中前三种蛋白主要在细胞凋亡方面发挥作用。最后,本研究通过对巨噬细胞中与Cas6互作蛋白的功能分析与总结,预测了结核分枝杆菌Cas6蛋白在侵染巨噬细胞时产生的凋亡通路。本研究将对结核分枝杆菌中CRISPR/Cas系统在结核病发病过程中的作用提供了重要的理论基础。