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目的:（1）对抗肿瘤药二乙酰二去水卫矛醇（Diacetyldianhydrogalactitol,DADAG）的合成工艺进行考察,选出合成DADAG的最佳工艺。（2）考察DADAG对六种肿瘤细胞的体外抗肿瘤活性,选出对DADAG最敏感的肿瘤细胞株。（3）研究DADAG诱导人肺癌细胞NCI-H460的凋亡作用,初步探讨其诱导凋亡的可能作用机制。（4）初步探讨DADAG对斑马鱼胚胎发育的影响。方法:（1）以二去水卫矛醇（DAG）为原料与乙酰氯反应,通过改变物料比、时间、温度、溶剂4种条件,计算各条件下合成DADAG的收率;并通过红外（IR）光谱、1H-NMR、13C-NMR谱分析确证化合物结构。（2）DADAG对人肺癌细胞NCI-H460、A549、人肝癌细胞SMMC-7721、Hep G2、人鼻咽癌细胞HNE-1、人胃癌细胞MGC-803体外抗肿瘤活性的筛选:（1）建立六种肿瘤细胞培养体系,采用倒置显微镜观察DADAG对六种肿瘤细胞形态学的影响;（2）采用不同浓度的DADAG处理NCI-H460、A549、SMMC-7721、Hep G2、HNE-1、MGC-803细胞48 h,其中NCI-H460、A549、SMMC-7721、Hep G2细胞药物处理浓度为2.88,5.75,11.50,23.00,46.00μg/m L,同时设置空白组;HNE-1、MGC-803细胞药物处理浓度为11.50,23.00,46.00,69.00,92.00μg/m L,同时设置空白组。采用噻唑蓝比色法（MTT比色法）检测DADAG对六种肿瘤细胞的体外增殖情况,计算六种肿瘤细胞的增殖抑制率及半数抑制浓度IC50,选出对DADAG最敏感的细胞株进行后续研究;（3）采用集落形成实验检测不同浓度的DADAG（0.00,11.50,23.00,46.00,69.00μg/m L）对NCI-H460细胞增殖的影响。（3）DADAG对NCI-H460细胞凋亡的影响:（1）采用吖啶橙/溴乙锭（AO/EB）染色法于荧光显微镜下观察经DADAG处理后NCI-H460细胞凋亡形态学的改变;（2）采用流式细胞术检测DADAG对NCI-H460细胞凋亡的影响;（3）采用流式细胞术检测DADAG对NCI-H460细胞周期的影响。（4）采用Real-time PCR（RT-PCR）技术检测经DADAG作用后,NCI-H460细胞内Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9 m RNA表达水平的变化。（5）初步探讨DADAG对斑马鱼胚胎发育的影响:将受精后6 h（hour post fertilization,hpf）发育正常的斑马鱼胚胎暴露在含有不同浓度的DADAG培养液中,分别在24 hpf、48 hpf、72 hpf阶段观察斑马鱼胚胎的自主抽动次数、心率、孵化率、死亡率及畸形率。（6）统计方法:实验数据均用（?x±s）表示,采用SPSS17.0软件进行统计分析,实验组与空白组之间的比较采用单因素方差分析,结果以P﹤0.05、P﹤0.01或P﹥0.05说明差异是否有统计学意义。结果:（1）当乙酰氯与DAG的用量比为8:1,反应时间4 h,反应温度30℃时,得到的DADAG收率较高。目标化合物的熔点为103～104.5℃,结构经IR与1H-NMR、13C-NMR谱确证,总收率为93.60%,纯度为95%。（2）（1）在倒置显微镜下观察到正常培养的NCI-H460、A549、SMMC-7721、Hep G2、HNE-1、MGC-803细胞均贴壁生长,细胞质透亮,生长状态良好。经DADAG处理后的细胞与空白组细胞比较,细胞形态发生了变化,表现为细胞圆缩、细胞质浓缩、包膜受损,贴壁能力减弱等;（2）不同浓度的DADAG对NCI-H460、A549、SMMC-7721、Hep G2、HNE-1、MGC-803细胞作用48 h的OD值均较空白组低,差异有统计学意义（P﹤0.05）。随着给药浓度的增大,给药组OD值逐渐减小,说明药物对细胞的增殖抑制作用逐渐增强。DADAG作用于NCI-H460、A549、SMMC-7721、Hep G2、HNE-1、MGC-803细胞48 h后的IC50值分别为24.79,47.75,145.39,28.60,49.36,141.29μg/m L;（3）不同浓度的DADAG作用于NCI-H460细胞后,与空白组比较,DADAG处理组的集落形成明显受到抑制,随着给药浓度的增大,集落形成抑制越来越强。（3）DADAG对NCI-H460细胞凋亡的影响:（1）AO/EB染色结果:空白组细胞在荧光显微镜下可观察到核染色质呈绿色,形态正常,细胞质透亮;DADAG处理组细胞在荧光显微镜下可观察到核染色质呈橘红色,且随着给药剂量的增加,被染成橘红色的细胞数增多,细胞形态表现为细胞圆缩,不规则;（2）流式细胞术检测经不同浓度DADAG（0.00,23.00,46.00,69.00μg/m L）作用后细胞凋亡率分别为（13.13±0.87）%,（28.94±0.44）%,（40.06±0.91）%,空白组细胞凋亡率为（5.71±0.88）%,DADAG处理组与空白组比较,细胞的凋亡率显著升高,差异有统计学意义（P﹤0.05）;（3）经不同浓度DADAG（0.00,23.00,46.00,69.00μg/m L）作用48 h后,NCI-H460细胞周期中的G1期细胞百分比分别为（71.90±0.96）%,（62.35±1.02）%,（54.24±0.43）%,（32.82±0.87）%,G2期细胞百分比分别为（5.73±0.45）%,（13.23±0.28）%,（22.32±0.28）%,（35.32±0.36）%,S期细胞百分比分别为（19.48±0.47）%,（22.11±0.26）%,（22.80±0.25）%,（26.62±0.45）%。经分析,与空白组比较,DADAG处理后的各组细胞周期内的G1期细胞百分比显著降低,G2期细胞百分比显著升高,差异有统计学意义（P﹤0.05,P﹤0.01）;S期细胞百分比无明显变化,差异无统计学意义（P﹥0.05）。（4）RT-PCR结果可知:DADAG作用于NCI-H460细胞48 h后,与空白组比较,Bcl-2的表达量下调,Bax、Caspase-3的表达量上调,Caspase-9的表达变化不明显。（5）DADAG对斑马鱼胚胎发育的影响:与空白组比较,各暴露组24 hpf自主抽动次数减少,48 hpf心率升高,孵化率降低,差异有统计学意义（P﹤0.05）。48 hpf后出现脊椎弯曲,心包出血、心包水肿、色素变浅等毒性症状。斑马鱼胚胎死亡率及畸形率均随着给药浓度的增加,给药时间的延长而增加。结论:（1）以DAG为原料与乙酰氯反应合成DADAG较合适的条件为:乙酰氯与DAG的用量比为8:1,反应时间为4 h,反应温度30℃,其结构经IR、1H-NMR、13C-NMR谱确证。（2）DADAG对NCI-H460、A549、SMMC-7721、Hep G2、HNE-1、MGC-803细胞有明显的生长抑制作用,具有体外抗肿瘤活性;DADAG能诱导NCI-H460细胞产生凋亡,其诱导凋亡的机制可能与Bcl-2下调、Bax上调,Caspase-3被激活有关。（3）DADAG对斑马鱼胚胎发育有毒性作用。