目的:　　本研究以内毒素(LPS)激活人脐静脉内皮细胞(HUVECs)释放炎症因子为模型，探索氯化镧(LaCl3)对血管内皮细胞NF-κB-Jmjd3信号轴的影响，并分析其可能的表观遗传学调控机制，为有效抑制血管炎症反应，开发稀土药用价值提供实验依据。　　方法:　　1、细胞培养及分组:复苏并常规培养原代HUVECs，将处于对数生长期的HUVECs随机分为空白对照组（control:给予无血清培养基培养2h）、LPS组(以含1μg/ml LPS的无血清培养基培养2h)、LaCl3组(以含2.5μM/ml LaCl3无血清培养基孵育细胞2h)及LPS+LaCl3组(以含2.5μM/ml LaCl3无血清培养基预处理细胞30min后，更换含1μg/ml LPS无血清培养基继续作用细胞2h)。　　2、MTT法检测LaCl3对HUVECs细胞活力的影响。　　3、分离HUVECs胞浆及胞核蛋白，蛋白质印迹法检测NF-κB信号系统相关蛋白表达水平。　　4、Millipore转录因子试剂盒检测胞核提取物中NF-κB/p65蛋白与靶序列的结合活性。　　5、采用实时定量PCR及蛋白质印迹法从mRNA及蛋白质水平检测HUVECs中Jmjd3的表达量。　　6、应用Millipore染色质免疫共沉淀试剂盒建立NF-κB/p65、Jmjd3及H3K27me3关联的DNA文库，结合实时定量PCR分析在目标基因TNF-α、MMP-9、IL-6、IL-1β、COX-2及ICAM-1转录起始结合位点NF-κB/p65、Jmjd3、H3K27me3的富集变化。　　7、采用实时定量PCR法及ELISA试剂盒分别检测细胞中TNF-α、MMP-9、IL-6、IL-1β及ICAM-1炎性基因的表达水平及其在细胞上清液中浓度的变化。　　结果:　　1、LaCl3对HUVECs活力的影响:与对照组比较，当LaCl3浓度为2.5、5.0、25、50、100μmol/L时HUVECs的生长情况无明显差异，当作用浓度为200μmol时，HUVECs的生长出现抑制现象(与对照组相比P＜0.05)，实验浓度(2.5μmol/L)的LaCl3对HUVECs未体现出毒性作用。　　2、LaCl3抑制LPS诱导HUVECs NF-κB-Jmjd3表达上调:(1)Western-Blot结果示，与对照组相比，LPS组胞核NF-κB/p65表达水平明显升高，而LPS+ LaCl3组则显著下调，LaCl3组NF-κB/p65表达水平变化不明显;IκBα的表达量在对照组为最高，其次是LaCl3组，表达略有下调，而在LPS组则出现显著下调，IκBα的表达量在LPS+LaCl3组则低于LaCl3组，但与LPS组相比无明显变化。(2)Jmjd3的表达与活性:RT-qPCR与Western-Blot结果基本一致，相对于对照组，LPS组Jmjd3基因表达水平提高，LPS+LaCl3组则显著下降，差异具有统计学意义(P＜0.01)，而LaCl3组无明显差异。　　3、LaCl3对HUVECs中NF-κB/p65与其下游靶序列结合活性的影响:LPS作用于HUVECs后，NF-κB/p65结合DNA的活性显著高于对照组(P＜0.01)，而LPS+LaCl3组显著低于LPS组(P＜0.01)，LaCl3组与对照组相比则变化不显著。　　4、NF-κB/p65与炎性基因启动子结合水平分析:NF-κB/p65关联的DNA文库结合实时定量PCR分析提示:(1) LPS组:NF-κB/p65在TNF-α、MMP-9、IL-6、IL-1β、COX-2及ICAM-1基因启动子区的募集量明显高于对照组，差异均具有统计学意义(P＜0.05);(2) LPS+LaCl3组:NF-κB/p65在上述基因启动子区的募集量均明显低于LPS组(P＜0.05);与对照组相比，NF-κB/p65在TNF-α、IL-6、IL-1β及ICAM-1基因启动子区的募集量明显下降(P＜0.05)，而在MMP-9及COX-2基因启动子区的募集量无明显变化。(3) LaCl3组:与对照组相比，NF-κB/p65在TNF-α、ICAM-1基因启动子区的募集量明显升高(P＜0.05)，而在IL-6、IL-1β、及COX-2基因启动子区的募集量无显著差异，在MMP-9基因启动子区的募集量则显著下降(P＜0.05);可见LaCl3可以抑制阻断LPS诱导的NF-κB/p65在促炎基因启动子区的富集，而单独使用LaCl3作用细胞，胞内NF-κB/p65在促炎基因启动子区富集的调控则存在多样性，使其募集量在TNF-α及ICAM-1基因启动子区明显升高，在IL-6、IL-1β及COX-2基因启动子区无明显变化，而在MMP-9基因启动子区的募集量则显著下降。　　5、Jmjd3与炎性基因启动子结合水平分析:Jmjd3关联的DNA文库结合实时定量PCR分析提示:(1)与对照组相比，LPS组及LaCl3组Jmjd3在上述基因启动子区的募集量均显著升高(P＜0.05);(2) LPS+LaCl3组:Jmjd3在上述基因启动子区的募集量要明显低于LPS组，差异具有统计学意义(P＜0.05);与对照组相比，Jmjd3在IL-1β及COX-2基因启动子区的募集量明显下降，在IL-10及ICAM-1基因启动子区的募集量明显升高，具有统计学意义(P＜0.05)，而在TNF-α、MMP-9及IL-6基因启动子区的募集量无明显变化。表明LaCl3可以抑制LPS诱导的Jmjd3在TNF-α、MMP-9、IL-6、IL-1β、COX-2及ICAM-1基因启动子区的富集，而单独使用LaCl3孵育HUVECs发现Jmjd3在促炎基因启动子区的募集量均显著升高。　　6、炎性基因启动子区H3K27me3甲基化水平分析:H3K27me3关联的DNA文库结合实时定量PCR分析提示:(1) LPS组:H3K27me3在上述基因启动子区的水平明显低于control组(P＜0.05);(2) LPS+LaCl3组:在上述所有基因启动子区的水平要明显高于LPS组，但同时低于对照组，差异均具有统计学意义(P＜0.05);(2) LaCl3组:与对照组相比，H3K27me3在TNF-α、IL-6、COX-2及ICAM-1基因启动子区的水平明显升高(P＜0.05)，在MMP-9基因启动子区的水平明显低于对照组(P＜0.05)，而在IL-1β基因启动子区的水平无明显变化。可见LaCl3可以抑制上述炎性基因启动子区的H3K27me3去甲基化，单独使用LaCl3处理HUVECs，H3K27me3的水平在TNF-α、IL-6、COX-2及ICAM-1基因启动子区升高，在MMP-9基因启动子区则下降，在IL-1β基因启动子区则无明显变化。　　7、LaCl3抑制LPS诱导的内皮细胞炎性介质的表达与释放:RT-qPCR及ELISA（酶联免疫吸附法）分别在mRNA及蛋白水平显示，与对照组相比，TNF-α、IL-6、IL-1β、ICAM-1及MMP-9在LPS组表达量显著增多，LaCl3组无显著变化，而在LPS+LaCl3组，上述炎性介质的表达与释放明显低于LPS组，差异具有统计学意义(P＜0.05)。表明LaCl3可以有效抑制LPS引起的TNF-α、MMP-9、IL-6、IL-1β及ICAM-1的分泌。　　结论:　　1、LPS通过诱导HUVECs中NF-κB/p65的活化并使其转位入核进而上调Jmjd3的表达。 Jmjd3入核作用于炎性基因启动子区的H3K27me3使其去甲基化，暴露目标基因转录起始序列，并促进NF-κB/p65及Jmjd3在促炎基因启动子区富集，三者相互协同，激活炎性基因TNF-α、MMP-9、IL-6、IL-1β、COX-2及ICAM-1的表达。　　2、LaCl3通过阻断LPS诱导的HUVECs中NF-κB/p65的活化及核转位，抑制Jmjd3的表达上调。减少LPS诱导的NF-κB/p65及Jmjd3在促炎基因启动子区的富集，并抑制促炎基因启动子区H3K27me3的去甲基化，使炎性基因保持沉默状态，从而抑制LPS诱导的HUVECs分泌炎性因子TNF-α、MMP-9、IL-6、IL-1β及ICAM-1。　　3、在本研究中作为对照的LaCl3组中，笔者发现虽然LaCl3可促使HUVECs中Jmjd3在促炎基因启动子区募集量的显著增加，但这一现象并未导致促炎因子的表达上调。进一步分析发现，NF-κB/p65-Jmjd3的表达与活性均受到LaCl3的抑制，上述促炎基因启动子区NF-κB/p65及H3K27me3的水平的调控则存在多样性，且在促炎症因子表达上调的精细调控过程中NF-κB/p65的募集与活性以及H3K27me3去甲基化缺一不可，体现出镧对促炎基因的表达的差异化调控机制。