【目的】有学者研究应用紫外线联合臭氧及高温诱导人外周血细胞凋亡,再将全血重新回注入患者体内,通过凋亡的血细胞(主要是淋巴细胞)诱导机体产生免疫耐受和抗炎反应,从而改善一些免疫炎症性疾病患者的预后。本研究通过观察紫外线、臭氧和高温对人外周血淋巴细胞的诱导作用,从而建立稳定的血细胞凋亡诱导系统,以供基础及临床研究。【方法】取健康成人外周静脉血,分别及联合应用紫外线、高温和臭氧进行诱导,采用淋巴细胞分离液密度梯度离心分离外周血淋巴细胞。通过瑞氏-姬姆萨染色涂片镜检、琼脂糖DNA凝胶电泳及流式细胞术定量测定,从细胞形态学、分子生物学以及细胞学水平观察细胞凋亡情况。【结果】紫外线照射、高温、臭氧诱导的淋巴细胞在瑞氏-姬姆萨染色后光镜下观察均可发现凋亡形态学改变, DNA电泳呈现有一定间隔的梯状条带;流式细胞术定量测定经单独紫外灯(15W,照射距离5cm)照射10 min,20 min,30 min,凋亡率分别为12.03%,16.98%,26.58%;单独经臭氧浓度分别为14.5、29、43.5μg/mL处理20 min,凋亡率分别为6.76%,26.38%,35.1%;单独经温度分别为40、42.5、45℃处理20 min,凋亡率分别为15.93%,26.83%,39.88%;经温度分别为40、42.5、45℃水浴联合紫外照射20 min,凋亡率分别为26.3%,36.3%,54.45%;经臭氧浓度分别为14.5、29、43.5μg/mL联合42.5℃水浴及紫外照射20 min共同诱导,其凋亡率分别达49.6%,76.15%,67.83%;淋巴细胞在高温、紫外线照射及臭氧的共同影响下,其诱导细胞凋亡反应较单一或两因素联合诱导显著提高(P<0.05),凋亡率在一定范围内可呈现时间和剂量效应关系。42.5℃水浴、臭氧浓度29μg/mL联合紫外照射20 min后所致淋巴细胞凋亡率最高。【结论】单独应用紫外线、温度及臭氧可诱导人外周血淋巴细胞凋亡,其凋亡率呈时间、温度依赖性;联合应用两者或三者可显著诱导外周血淋巴细胞凋亡,其凋亡率达到一个峰值后再降低,而坏死率可呈继续升高。