临床医生的诊断结论80%依靠检验结果。β2微球蛋白是肾脏疾病的最重要的诊断标志物之一,同型半胱氨酸(Hcy)是脑卒中的诊断标志物。由于相关标准物质的缺乏,检测试剂无法溯源,导致临床检验实验室的结果偏差大,严重影响病人的诊断和治疗。由于蛋白质的分子量大、结构复杂其标准物质研制难度极大,目前我国蛋白质类一级纯品标准物质仅有7个。本研究建立了两种不同原理的β21、Pro三种氨基酸进行定量,通过实验得到最优水解时间为36 h,同时优化了氨基酸及其标记氨基酸的质谱条件,得到水解法定值结果为199.35μg/g;另外一种是 酶 切 法,选 择 IQVYSR(IR),VNHVTLSQPK(VK),SNFLNCYVSGFHPSDIEVDLLK(SK)三条特征肽段进行定量,对定量所用的合成肽段进行了定性分析和纯度分析;优化酶切实验,蛋白与酶最优比为50:1;优化肽段的液相条件和质谱条件;得到酶切法定值结果为193.78μg/g。通过验证两种定值方法的结果一致性并计算实验过程引入的不确定度,最终得到β2微球蛋白纯品标准物质定值结果为(198.01±6.82)μg/g(k=2),为β2微球蛋白的标准物质研究奠定了良好基础。本研究针对脑卒中重要指标—Hcy组织了华东地区102家临床实验(包括45家三甲医院、56家二甲医院和1家独立实验室)的能力验证工作。通过6家参考实验室对考核样进行了赋值,并进行了互换性验证。通过应用自主研制的同型半胱氨酸标准物质,为Hcy能力验证工作提供了具有计量溯源保证的标准值。在能力验证补充实验中,25家实验采用Hcy标准物质校准后的测量系统检测样品,最终Hcyl样品仅4家不合格,不合格率降至16%;Hcy2样品检测结果全部合格,不合格率降低至0%;Hcy3样品检测仅1家不合格,不合格率降低至4%。校准后显著降低了Hcy测量偏差,建立了从溯源源头SI单位到终端用户的完整溯源链,为Hcy临床检验的溯源性提供了有力技术保支撑。