目的:⑴建立体外从单核细胞诱导DC的方法.⑵对不同来源的DC的免疫学特性及功能做一客观评价⑶初步探索KRN7000对体外诱导培养DC的影响.方法:⑴分离DC前体细胞通过密度梯度离心法分别从MM患者外周血、MM患者骨髓、正常人外周血和脐血中取得单个核细胞,培养2小时后获得贴壁的粘附细胞即为DC前体细胞.⑵DC的体外诱导粘附细胞加入含10％的RPMI1640培养,并加入555U/mlGM-GSF和500U/mlIL-4,每3天换液一次,共培养9天.在第7天加入100U/mlTNF- α,以获得成熟的DC.⑶KRN7000冲击DC按上述方法从脐血单核细胞诱导DC,在收获DC前加入100ng/ml KRN7000,以加入等量的Polysorbate-20的DC作为对照,12小时后收集DC.⑷DC的形态观察培养过程中,每天在倒置显微镜下观察DC形态;收集DC后,做电镜检查观察DC形态.⑸DC表型检测采用间接免疫荧光法检测DC表面CD1a、CD3、CD14、CD19和HLA-DR的表达,并对其免疫表型进行分析.⑹DC功能检测分别以MM患者外周血诱导的DC、从脐血诱导培养的DC、从脐血诱导培养且在第9天加入KRN7000的DC作为刺激细胞,以来自健康志愿者同种异体T淋巴细胞、脐血幼稚型T淋巴细胞作为效应细胞,按DC:T为1:100、1:50、1:20、1:10共培养72小时,以MTT法检测DC刺激T细胞增殖的能力.结论:⑴从MM患者外周血、MM患者骨髓、正常人外周血和脐血分离出 的单核细胞体外诱导DC,均可获得一定纯度的典型DC.⑵虽然CB-DC表面CD1a的表达较MM患者PBMo-DC低,但两者有相似的HLA-DR表达水平,刺激同种异体T淋巴细胞和幼稚型T淋巴细胞增殖能力也相似,而且CB来源丰富,可能成为体外诱导DC应用于MM患者免疫治疗的新来源.⑶KRN7000对DC表面CD1a分子的表达有一定的上调作用,明显加强了DC对同种异体T淋巴细胞和幼稚型T淋巴细胞的增殖效应,为如何增DC瘤苗的抗肿瘤作用提供了新的思路.