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第一部分耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药性和同源性分析目的收集我院临床分离的非重复耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(Carbapenemresistant Klebsiella pneumonia,CRKP),对其进行药敏试验及同源性进行分析,了解我院CRKP耐药情况,为临床科学使用药物和预防CRKP的感染提供合理的实验参考依据。方法收集筛选安徽医科大学第一附属医院2016年1月至12月间各科室送检标本分离的肺炎克雷伯菌,应用法国梅里埃VITEK 2 compact全自动微生物分析系统进行细菌鉴定和药敏试验,K-B法作为药敏补充实验,使用ERIC-PCR对耐药菌株的同源性进行分析。结果本次研究共收集25株CRKP,其中主要分布在ICU科室,占32%,其次是血液科,占20%。感染的标本以血液为主,占68%。药敏实验显示,头孢吡肟、环丙沙星、左氧氟沙星和呋喃妥因耐药率都大于90%以上,对哌拉西林/他唑巴坦、头孢呋辛、头孢他啶、头孢噻肟和氨曲南全部耐药,而对复方新诺明和米诺环素敏感率分别是:72%和92%,对多粘菌素B全部敏感。25株耐碳氢霉烯类肺炎克雷伯菌ERIC-PCR谱型表现为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅷ8种基因型,其中Ⅱ为主要流行株,共占56%。结论本院分离CRKP呈多重耐药性,防治比较困难,对临床抗感染治疗构成很大威胁,临床应加强防范和规范使用抗生素。ERIC-PCR显示流行菌株基因型主要为Ⅱ型。第二部分耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌基因型检测及临床资料回顾性分析目的使用不同试验方法对CRKP表型进行检测,并对这些试验方法的效能进行评价,为临床实验室检测碳青霉烯酶表型提供合理化检测方法。PCR法对肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因型进行测定,通过质粒接合试验探究耐药基因在菌株间水平转移,明确我院肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因型别、耐药性可通过质粒在细菌间相互传播,控制耐药菌株在医院的爆发流行。通过查询感染肺炎克雷伯菌患者的临床资料,回顾性分析患者的临床特征,对临床相关因素进行探讨。方法对筛选出来25株CRKP,采用改良Hodge试验(MHT)、Carba NP试验和改良碳青霉烯灭活试验(m CIM)对碳青霉烯酶表型进行检测。用EDTA双纸片协同试验对菌株是否产金属β-内酰胺酶进行测定。聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)方法检测碳青霉烯酶基因型别。质粒接合试验研究碳青霉烯酶基因是否通过质粒进行传递。查询CSKP(Carbapenem Sensitive Klebsiella Pneumoniae)和CRKP患者两组临床资料并分析。结果通过MHT试验、Carba NP试验和mCIM试验对25份菌株表型进行检测,结果具有一致性,其中阳性率为96%(24/25),阴性菌株为同一标本。协同试验未检测出B类碳青霉烯酶(金属酶)。PCR测序结果确证24株碳青霉烯酶表型试验阳性菌株均为KPC-2型基因,阴性菌株携带NDM-1基因。质粒转移接合试验发现,接合菌获得了耐碳青霉烯类药物耐药基因,对美罗培南和亚胺培南耐药性都有所增高。25例CRKP组患者和35例CSKP组患者进行统计学分析显示,CRKP在两组患者在血液标本、碳青霉烯类药物使用和侵入性治疗组的比例要明显高于CSKP组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论改良Hodge试验、Carba NP试验和mCIM试验均可准确筛查出产碳青霉烯酶的肺炎克雷菌。我院分离出携带KPC-2和NDM-1型碳青霉烯酶基因的肺炎克雷菌,KPC-2和NDM-1型碳青霉烯酶基因位于质粒上,可以通过质粒在菌株间相互传递。临床资料显示,侵入性治疗和碳青霉烯类药物的使用是导致耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌产生的主要因素。