植物种子的正常萌发需要适宜的温度、水分以及充足的营养物质,碳水化合物、脂类以及蛋白质作为植物种子中的主要贮藏物质,它们的存在为植物种子萌发提供了营养物质和能量,其中脂类作为一种高效的贮藏物质广泛存在于植物种子当中,而脂类的存在形式主要是由植物油体这种特殊的结构贮藏于植物种子当中。油体表面基本由油体相关蛋白镶嵌的磷脂单分子层所覆盖,油体在形成过程中,油体相关蛋白的疏水性和特异性结构维持了油体的形状大小和稳定性;油体在降级过程中,油体相关蛋白促进了脂酶的合成与活化。现阶段研究表明油体相关蛋白在油体的形成以及分解过程中起着非常重要的生物学作用。目前提取植物油体的主要方法为蔗糖密度梯度离心,需要耗费大量的实验材料以及昂贵的实验设备;同时对于禾本科植物种子而言,其脂类相对疏松、含量明显低于油料植物种子,导致禾本科植物油体不易收集和纯化。提取油体相关蛋白方法主要是利用有机试剂提取,即氯仿提取、石油醚提取或者甲醇与氯仿混合试剂提取,但实验结果大部分停留在单向电泳阶段,双向电泳研究较少,不利于油体相关蛋白的蛋白质组学分析。本实验选取玉米品种郑单958种子作为实验材料,使用PVDF膜和两步离心法分离和纯化玉米胚中油体,SDS加热法提取油体相关蛋白,利用氯仿/苯酚混合试剂去除杂质提高双向胶图分辨率,通过2-DE电泳和MS/MS技术对玉米胚中油体蛋白进行鉴定和生物信息学分析,现得到以下结果:(1)玉米种子油体相关蛋白具有疏水性,发现PVDF膜的疏水性可以与玉米种子油体进行相互吸附,从而使玉米种子油体富集,提高了玉米种子油体的回收率,较好改善了禾本科玉米种子油体的分离情况。(2)利用水溶性蛋白提取液和两步离心法对玉米种子油体进行反复纯化,可除去杂蛋白,留下目的蛋白。此方法有效的收集禾本科植物种子油体,得到的玉米种子油体纯度较高,便于研究禾本科玉米种子油体性质及油体相关蛋白。(3)利用1%SDS全蛋白提取液对纯化过的玉米种子油体进行油体相关蛋白的提取,首次使用金属浴95℃加热15min促进油体相关蛋白的提取,同时利用氯仿/苯酚(体积比1:3)混合试剂去除脂类等杂质,改善油体相关蛋白双向电泳的纵向拖尾问题。本课题运用PVDF膜分离和富集玉米种子油体,采用两步离心法重复离心纯化玉米种子油体,使用SDS金属浴加热法提取油体相关蛋白以及氯仿去除脂类等一系列改善方法,对收集玉米种子油体和提取油体相关蛋白的研究方法进行了改良。