【摘 要】
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目的:本研究依据前期膀胱癌环状RNA(circ RNA)高通量测序数据,重点关注高表达部分的circ RNA,选取膀胱癌组织相对癌旁正常组织表达显著升高的has_circ_0001361(circ0001361)作为研究对象并探讨其作为膀胱癌治疗靶点的应用价值以及在膀胱癌发展中的作用机制。方法:1.通过实时荧光定量PCR技术(q RT-PCR)检测膀胱癌组织以及细胞系中circ0001361的表达
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目的:本研究依据前期膀胱癌环状RNA(circ RNA)高通量测序数据,重点关注高表达部分的circ RNA,选取膀胱癌组织相对癌旁正常组织表达显著升高的has_circ_0001361(circ0001361)作为研究对象并探讨其作为膀胱癌治疗靶点的应用价值以及在膀胱癌发展中的作用机制。方法:1.通过实时荧光定量PCR技术(q RT-PCR)检测膀胱癌组织以及细胞系中circ0001361的表达情况。2.通过RNA荧光原位杂交技术(FISH)明确其在细胞中的定位。3.构建circ0001361过表达及敲低稳筛细胞系,通过一系列体内和体外实验研究circ0001361在膀胱癌细胞中的功能。4.通过RNA-seq寻找circ0001361调控的下游靶基因。5.采用生物信息学分析可能与circ0001361相互作用的mico RNA(miRNA),并通过RNA pull-down实验、RNA FISH进一步确定靶miRNA。6.通过双荧光素酶报告基因检测实验明确circ0001361及miRNA对下游靶基因的调控机制。结果:1.通过q RT-PCR证实circ0001361在膀胱癌组织及细胞系均呈高表达;并且circ0001361的表达水平与膀胱癌病理分级、临床分期、血管和肌层浸润密切相关;Kaplan-Meier生存分析表明高circ0001361表达水平提示预后不良。2.RNA FISH结果表明circ0001361主要定位于细胞质中。3.体内、体外实验均表明circ0001361促进膀胱癌细胞的侵袭和转移。4.circ0001361过表达后在T24T和UMUC3细胞中MMP9基因表达均上调。5.双荧光素酶实验表明circ0001361通过增强MMP9 3’-UTR活性从而促进MMP9表达。6.circ0001361可直接吸附miR-491-5p。7.miR-491-5p可作用于MMP9的3’UTR区,从而下调MMP9的表达。8.过表达circ0001361可逆转miR-491-5p的对膀胱癌细胞侵袭迁移的抑制作用和miR-491-5p下调MMP9表达的作用。结论:circ0001361在膀胱癌组织和细胞系中显著上调,主要分布在细胞质中,且与患者的临床病理分期、分级、血管侵袭以及不良预后密切相关。circ0001361可以通过竞争性结合miR-491-5p而上调miR-491-5p的靶基因MMP9的表达,从而促进膀胱癌侵袭和转移的发生。
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