环境因子对虎斑乌贼胚胎发育影响及海螵蛸止血效果研究

来源 :仲恺农业工程学院 | 被引量 : 3次 | 上传用户:ashdkja51321
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头足类是我国重要的海洋经济动物。由于生长速度快、营养丰富、市场价格走高,虎斑乌贼是极富潜力的名优水产养殖新品种。但是由于繁育技术的不完善,导致虎斑乌贼较低的受精卵孵化率和幼体成活率,限制其种苗的规模生产,也严重制约了该品种的规模化养殖。因此,开展虎斑乌贼的繁育和生理特性研究,可以为虎斑乌贼的人工繁殖提供技术支撑,同时其唯一的内骨骼具有治疗胃溃疡、凝血和止血的功效,为传统中药海螵鞘。本论文观察了虎斑乌贼受精卵的胚胎发育过程,探究了温度、盐度及p H值三种环境因子对其胚胎孵化率的影响,对其血细胞的形态结构进行了观察,同时对海螵鞘的氨基酸含量、化学成分含量以及体外止血效果进行了研究。主要研究结果如下:1、胚胎发育观察。采用显微成像系统记录了胚胎发育特征,将虎斑乌贼的胚胎发育过程分为8个不同时期:第一期:初生受精卵,卵黄一端有动物极。第二期:卵裂期,从卵黄动物极开始细胞分裂,逐步进入原肠期。第三期:突出发育期,胚胎向卵黄外突出发育。第四期:眼部发育出轮廓,器官开始分化。第五期:头部、腕部开始分化,胴体逐渐成型。第六期:各器官分化明显,腕部出现吸盘,眼部出现红色眼基。第七期:胚胎发育与成体结构基本相同,背部出现黑色墨囊,眼部出现黑色眼基。第八期:出膜期,幼体孵化破膜。2、温度、盐度和p H值对胚胎发育的影响。设置不同温度(18℃、21℃、24℃、27℃、30℃和33℃)、盐度(15‰、18‰、21‰、24‰、27‰、30‰、33‰和36‰)和p H值(7.0、7.5、8.0和8.5),测定虎斑乌贼受精卵的孵化率和孵化时间。结果显示,受精卵可孵化温度为21℃~30℃。在27℃时,孵化率(72.2%)相较于其他组别显著升高(P<0.05),随着温度的升高,孵化时间有缩短趋势。在30℃时,孵化时间相较其他组别显著缩短(P<0.05)。受精卵可孵化盐度为27~36‰,在盐度30~33‰范围下孵化率最高,可达70%~80%。p H值对虎斑乌贼受精卵孵化率影响并不显著(P>0.05),在p H值7~8.5条件下均可孵化,孵化率均大于70%。因此,在温度27℃,盐度30~33‰及PH7~8.5范围内,虎斑乌贼受精卵孵化率可达到最高,人工育苗可参考此条件设置孵化条件。3、血细胞形态观察。采集虎斑乌贼血细胞,随后用吉姆萨染液对其染色,使用显微成像系统观察并拍照。根据血细胞大小、外观形态及细胞质颗粒的有无、颗粒大小和密度等,可将虎斑乌贼血细胞分为颗粒细胞、小颗粒细胞、马蹄形细胞以及透明细胞等四种。其中颗粒细胞细胞质类有大量颗粒,体积较大,约占细胞总数30%;透明细胞细胞质内无颗粒状物质,体积最大,数量最少,约占细胞总数15%;小颗粒细胞细胞质类有少量颗粒,体积最小,数量最多,约占血细胞总数50%;马蹄形细胞为不规则马蹄形,数量最少,约占血细胞总数5%。4、虎斑乌贼海螵鞘主要成分分析及止血效果研究。对海螵鞘中的化学元素和碳酸钙含量进行了测定。结果表明,海螵鞘中主要的化学成分是Ca CO3,其比例高达81.4%。海螵鞘的化学元素主要有Ca、Na、K、P、Mg、Zn、Fe、Gu和Mn九种,其中含大量的Ca,约占34.99%,P的含量是0.029%。Na:1.04×104mg/kg,Mg:1.91×103mg/kg,K:334 mg/kg,Zn:299 mg/kg,Fe:171 mg/kg,Cu:5.43 mg/kg,Mn:10.2mg/kg,同时检测海螵鞘中氨基酸共有15种,其按照含量排列为Met>Asp>Glu=Tyr>Leu>Ala>Ser>Val>Gly>Lys>His>Ile>Thr>Phe>Arg。通过小鼠体外创伤止血实验,将海螵鞘与其他常见止血材料的止血效果进行了比较。结果表明海螵鞘粉止血效果与云南白药效果差差异不显著,但显著好于自然止血组、碳酸钙组和淀粉组,表明海螵鞘对于小鼠具有良好的外伤止血效果。
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