本研究通过钩藤（Uncaria rhynchophylla（Miq.）.ex Havil.）种子萌发获得无菌苗,以其叶片、叶柄及茎段为试验材料,探究了钩藤愈伤组织诱导及分化再生的发生过程及影响因素,筛选确定适宜的愈伤组织诱导及分化培养条件,建立了钩藤的组培再生体系。以再生体系为基础,借助叶盘法筛选确定以农杆菌介导的钩藤遗传转化中卡那霉素（Kanamycin）的有效筛选压、确定最佳抑菌浓度;通过探究预培养时间、农杆菌侵染浓度、侵染时间、共培养时间及共培养基中AS浓度对钩藤瞬时转化效率的影响,确定最佳遗传转化条件,初步建立了钩藤遗传转化体系,主要研究结果如下:1.钩藤组培再生体系的建立用0.1%Hg Cl、75%乙醇及10%Na Cl O设置不同水平的消毒时间,对钩藤种子消毒灭菌后萌发获得无菌苗。以无菌苗叶片、叶柄及茎段为外植体诱导愈伤,先通过单因素试验确定愈伤诱导的最佳基本培养基、蔗糖浓度及光照条件,再以单因素试验结果为基础,设计三因素三水平正交试验确定诱导愈伤的最佳激素组合;将诱导所得愈伤组织转接至分化培养基中,通过添加不同浓度的外源激素筛选诱导不定芽发生的最佳激素组合;对不同基本培养基、蔗糖浓度及外源激素配比进行探究,筛选最佳生根诱导培养基,结果表明:对钩藤种子消毒灭菌效果最佳组合为75%乙醇15 s+10%Na Cl O 8 min。诱导钩藤愈伤组织的最佳外植体为茎段,最佳愈伤诱导培养基及培养条件为WPM+3mg·L-12,4-D+2 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA+30 g·L-1蔗糖,遮光培养,愈伤诱导率最高为97.96%。不定芽诱导的最佳激素组合是0.5 mg·L-1NAA+3.5 mg·L-1KT,出芽率为87.60%。生根最佳基本培养基为WPM,同时蔗糖浓度为20 g·L-1可以有效降低钩藤幼苗的玻璃化程度,最佳激素组合是3 mg·L-1IAA+1 mg·L-1NAA,生根率最高为98.33%。2.钩藤遗传转化体系的建立以钩藤叶片、叶柄及茎段为转化受体,通过单因素试验探究不同浓度卡那霉素,噻孢霉素（Cefalotin）及特美汀（Timentin）对钩藤愈伤诱导率的影响,结果表明:茎段对Kan的敏感性比叶片及叶柄要弱;叶片进行遗传转化时卡那霉素的有效筛选压为50 mg·L-1,叶柄进行遗传转化时卡那霉素的有效筛选压为70 mg·L-1,茎段进行遗传转化时卡那霉素的有效筛选压为90 mg·L-1;对不同种类抑菌剂下愈伤诱导情况的观察发现,Tim对钩藤的伤害比Cef要小,因此在钩藤遗传转化后期除菌时,优先选择Tim对外植体进行除菌操作,并取Tim浓度为90 mg·L-1作为抑菌浓度。通过探究不同预培养时间、农杆菌侵染浓度、侵染时间、共培养时间及共培养基中AS浓度对钩藤不同外植体遗传转化效率的影响,以GUS瞬时表达率来确定最佳的遗传转化条件,结果表明,钩藤进行遗传转化最佳外植体为叶片,其GUS瞬时表达率最高,其次是叶柄,转化效果最差的为钩藤的茎段。钩藤叶片的最佳遗传转化条件为:预培养2 d、OD600=0.8浸泡30 min,共培养基中添加120μmol·L-1的AS并共培养2 d;钩藤叶柄的最佳遗传转化条件为:预培养2 d、OD600=0.8浸泡40 min,共培养时添加120μmol·L-1 AS,共培养2 d;钩藤茎段最佳遗传转化条件为:预培养2 d、OD600=0.8浸泡40 min,共培养基中添加150μmol·L-1的AS、共培养2 d。再以钩藤叶片为外植体,利用获得的最优条件进行遗传转化操作,通过抗性筛选获得抗性幼苗,提取抗性幼苗RNA,反转录合成c DNA后进行PCR扩增,结果表明GUS基因已经顺利整合到了钩藤的基因组中并成功表达,阳性率约为20%。本试验成功构建钩藤的遗传转化体系,对钩藤的育种及分子遗传改良等相关研究具有重要意义。