目的：严重烧伤，将引起机体免疫功能紊乱，主要表现为免疫抑制，烧伤免疫抑制使病人发生严重感染、多器官功能障碍综合症(MODS)的几率增加。大量的实验详细的阐述了免疫抑制的机制，其中包括外周血中T淋巴细胞免疫功能障碍、巨噬细胞介导的炎症介质变化和Th1／Th2功能性极化向Th2方向的漂移等。然而，这些研究仅仅揭示了烧伤后系统免疫功能的变化，而有烧伤引起的局部免疫功能变化知之甚少。本实验的目的在于通过检测大鼠烧伤创面引流淋巴液内TNF-α、IFN-γ、IL-4水平和IFN-γ／IL-4比值变化，以及烧伤创面引流淋巴结内CD4+、CD8+T淋巴细胞比例和CD4+／CD8+T淋巴细胞比值变化来探讨烧伤对局部免疫功能的影响。方法：24只清洁级成年雄性Wistar大鼠，3％戊巴比妥钠(40mg／kg)腹腔内注射麻醉，麻醉成功后，单侧后腿(随机)浸于70℃热水30秒，造成单侧后腿4％TBSA深Ⅱ度烫伤，对侧后腿浸于22℃热水30秒，分为烧伤腿组(A组)和对侧未烧伤腿组(B组)，烫伤后给予头孢哌酮腹腔注射以防止感染(40mg／kg／day)。术后将大鼠单独置于放有无菌布单的大鼠饲养笼中，大鼠清醒后即可自由饮食。实验分为3个时间点：烧伤后6小时(6只)、烧伤后24小时(6只)、烧伤后72小时(6只)。C组(6只)为假烫伤组，未接受任何处理。标本收集方法如下：麻醉成功后，刮除腹部毛发，沿腹部正中做切口，长约5厘米，先把肠管翻向左侧，在右下腹腔即可看到右髂总淋巴结，在手术显微镜下仔细分离右髂总淋巴结的输出淋巴管，游离出大约1.5～2厘米，用3-0丝线结扎其上端，对侧接受同样的处理。将大鼠双侧后腿按摩约30分钟，使淋巴管充盈，用针头(直径0.45mm)插入充盈的淋巴管，抽出淋巴液约40μl，将淋巴液置于Eppendorf管中，加入肝素(终浓度20IU／ml)以防止其凝固，将淋巴液立即置于离心机离心(600转／分钟)10分钟，取其上清，即淋巴浆，将淋巴浆置于-80℃超低温冰箱待测。在取完淋巴液后，随后收集髂总淋巴结。应用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)检测淋巴液内TNF-α、IFN-γ、IL-4水平，应用流式细胞术检测淋巴结内CD4+、CD8+T淋巴细胞比例。结果：烧伤后6、24和72小时，TNF-α水平，A组显著高于B组(51.62±5.36对17.84±1.58 p＜0.01，27.35±2.57对16.44±1.21 p＜0.01，23.04±2.67对17.24±2.05 p＜0.05，pg／ml)。烧伤后6、24和72小时，IFN-γ水平，A、B两组间比较差异无显著性。烧伤后6、24和72小时，IL-4水平，A组显著高于B组(14.15±1.08对8.97±0.72 p＜0.05，19.76±2.15对9.37±0.78 p＜0.05，14.37±1.73对8.80±1.24 p＜0.01，pg／ml)。烧伤后6、24和72小时，IFN-γ／IL-4比值，A组显著低于B组(2.27±0.34对3.33±0.25 p＜0.05，1.54±0.19对3.34±0.22 p＜0.05，1.60±0.16对2.52±0.24，p＜0.01)。烧伤后6和24小时，CD4+T淋巴细胞比例，A、B两组间比较差异无显著性(45.78±2.97％对48.90±2.39％，43.42±1.50％对46.05±3.27％，p＞0.05)，而烧伤后72小时，A组显著低于B组(38.55±2.26％对48.87±2.90％，p＜0.05)。烧伤后6、24和72小时，CD8+T淋巴细胞比例，A、B两组间比较差异无显著性(17.67±0.39％对18.26±0.48％，18.31±1.12％对19.00±0.74％，18.28±0.57％对17.95±0.74％，p＞0.05)。烧伤后6和24小时，CD4+／CD8+T淋巴细胞比值，A、B两组间比较差异无显著性(2.58±0.14对2.72±0.19，2.41±0.16对2.42±0.15，p＞0.05)，而烧伤后72小时，A组显著低于B组(2.13±0.16对2.68±0.12，p＜0.05)。结论：1、烧伤能够引起局部引流淋巴液的TNF-α水平升高。2、烧伤能够引起局部引流淋巴液IL-4水平升高，从而降低引流淋巴液IFN-γ／IL-4(Th1／Th2细胞因子)比值，抑制局部免疫功能。3、烧伤能够引起局部引流淋巴结内CD4+T淋巴细胞比例降低，从而降低引流淋巴结内CD4+／CD8+T淋巴细胞比值，抑制局部免疫功能。目的：烧伤创面感染是烧伤的常见的并发症之一，它使机体发生全身炎症反应综合征(SIRS)、多器官功能障碍综合症(MODS)及死亡的几率增加。许多研究者相信烧伤创面的细菌和内毒素能够入侵感染组织的毛细血管，然后进入血液循环，从而导致菌血症和内毒素血症。然而，对于烧伤创面的细菌和内毒素是否通过淋巴途径入侵机体这一问题还不清楚。另外，烧伤创面的绿脓杆菌感染将引起机体免疫抑制，大量的实验详细的阐述了免疫抑制的机制，其中包括外周血中T淋巴细胞免疫功能失调、炎症因子的质和量的变化等。然而，这些实验仅仅证明了烧伤创面被绿脓杆菌感染后机体发生的系统免疫应答变化，而绿脓杆菌是否引起引流淋巴结和引流淋巴液的局部免疫应答变化，对这一问题的研究还未见报道。本实验的目的在于通过检测绿脓杆菌感染烧伤创面的引流淋巴结内绿脓杆菌含量和引流淋巴液内毒素含量来研究烧伤创面细菌及内毒素的淋巴入侵途径。另外，我们还通过检测绿脓杆菌感染的烧伤创面的引流淋巴液TNF-α水平及引流淋巴结CD4+、CD8+T淋巴细胞比例和CD4+／CD8+T淋巴细胞比值来探讨烧伤创面的绿脓杆菌对局部免疫功能的影响。方法：24只清洁级成年雄性Wistar大鼠在腹腔麻醉下，将大鼠双侧后腿浸于99℃热水13秒钟，造成约8％TBSA(每侧4％)全层皮肤烫伤，烫伤后立即给予腹腔无菌生理盐水注射(11ml／Kg)补液抗休克治疗，烫伤后15分钟，单侧后腿(随机)给予绿脓杆菌菌液0.5ml(1×10~8cfu)皮下注射，对侧后腿给予0.5ml无菌生理盐水皮下注射，烧伤及感染创面未给予包扎，将其分为烧伤+感染腿组(A组)和对侧烧伤腿组(B组)，分为3个时间点：烧伤后6小时(6只)、烧伤后24小时(6只)、烧伤后72小时(6只)。C组(6只)为假烫伤组，未接受任何处理。术后将大鼠单独置于放有无菌布单的大鼠饲养笼中，大鼠清醒后即可自由饮食。标本收集方法如下：麻醉成功后，刮除腹部毛发，在无菌条件下，沿腹部正中做切口，长约5厘米，先把肠管翻向左侧，在右下腹腔即可看到右髂总淋巴结，在手术显微镜下仔细分离右髂总淋巴结的输出淋巴管，游离出大约1.5～2厘米，用3-0丝线结扎其上端。对侧接受同样的处理。将大鼠双侧后腿按摩30分钟后，使淋巴管充盈，用一次性使用静脉输液针(直径0.45mm)插入充盈的淋巴管，抽出淋巴液约40μl，将淋巴液置于无热源Eppendorf管中，加入肝素(终浓度20IU／ml)以防止其凝固，将淋巴液立即置于离心机离心(600转／分钟)10分钟，取其上清，即淋巴浆，将淋巴浆置于80℃超低温冰箱待测。取完淋巴液后，收集髂总淋巴结，将髂总淋巴结分为两份。应用鲎试剂显色基质法检测淋巴液的内毒素水平，应用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent as say，ELISA)检测淋巴液TNF-α水平，应用细菌培养法检测淋巴结细菌数量，应用流式细胞术检测淋巴结CD4+、CD8+T淋巴细胞比例。结果：烧伤+感染后6、24和72小时，A组细菌感染率显著高于B组(100％对0％p＜0.01，100％对0％p＜0.01，100％对0％p＜0.01)。烧伤+感染后6、24和72小时，淋巴液内毒素水平，A组显著高于B组(2.813±0.116对0.316±0.024P＜0.01，2.534±0.252对0.287±0.020 P＜0.01，1.382±0.170对0.276±0.022 P＜0.01，EU／ml)。淋巴结的活的绿脓杆菌数量与淋巴液的内毒素含量无相关关系(r=-0.14，P＞0.05)。烧伤+感染后6、24和72小时，淋巴液TNF-α水平，A组显著高于B组(170.66±16.18对28.53±3.06 P＜0.01，131.43±10.55对27.03±1.93 P＜0.01，57.63±6.97对19.27±2.29 P＜0.01，pg／ml)。烧伤+感染后6、24和72小时，CD4+T淋巴细胞比例，A、B两组间比较差异无显著性(40.6±1.20％对45.7±1.13％，41.0±1.32％对43.1±1.43％，36.2±0.96％对40.6±1.21％，p＞0.05)。烧伤+感染后6、24和72小时，CD8+T淋巴细胞比例，A、B两组间比较差异无显著性(20.3±1.04％对19.8±0.47％，18.9±0.35％对18.4±0.93％，18.2±0.53％对17.9±0.67％，p＞0.05)。烧伤+感染后6和24小时，CD4+／CD8+T淋巴细胞比值，A、B两组间比较差异无显著性(2.00±0.20对2.31±0.13，2.17±0.09对2.34±0.17，p＞0.05)，而烧伤+感染后72小时，A组显著低于B组(1.99±0.12对2.27±0.19，p＜0.05)。结论：1、绿脓杆菌感染的烧伤创面，其绿脓杆菌和内毒素能够通过淋巴途径入侵机体。2、烧伤创面的绿脓杆菌能够引起局部引流淋巴液的TNF—a水平升高。3、烧伤创面的绿脓杆菌能够引起局部引流淋巴结CD4+／CD8+T淋巴细胞比值降低，抑制局部免疫功能。