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背景:乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，在一些大中城市，乳腺癌已居女性恶性肿瘤死亡的首位。目前乳腺癌的主要治疗手段仍为手术、化疗和放疗。但对于进展期的乳腺癌的治疗效果并不理想，而早期诊断和治疗能极大提高乳腺癌的治愈率。乳腺癌发现早期较易控制和治疗，乳腺癌特异性抗原或相关抗体的的发现对于乳腺癌的早期诊断具有重要意义，而该过程中乳腺癌抗原cDNA文库的构建是基础。应用噬菌体cDNA表达文库展示组织来源的蛋白序列筛选抗体结合或功能区域。筛选试验中表达多肽的序列正确性很关键。未经开放阅读框（ORF）筛选的cDNA文库中能表达有意义多肽的重组序列只占6%[1]。ORF是结构基因的正常核苷酸序列，包含起始密码子和终止密码子，可编码完整的多肽，其间不存在使翻译中断的终止密码子。我们在T7噬菌体多克隆位点的C-端加上His标签，使得只有插入ORF的噬菌体才能表达多聚组氨酸，然后通过过镍柱，分离出含有ORF的噬菌体，从而得到高质量的噬菌体展示文库。方法：首先合成两端带有酶切位点的His标签表达序列的互补链，将其复性，与T7Select10-3b载体连接，体外包装，得到具有侵染活性的T7噬菌体，由于选取酶切位点的特殊性，故需要二次连接和包装，最终得到插入His标签的T7噬菌体。然后用Trizol法提取乳腺癌组织的总RNA，分离纯化mRNA，逆转录合成双链cDNA，经末端修饰，EcoRI/HindIII接头连接、消化，使其两端分别带有EcoRI和HindIII粘性末端。用Mini Column分离cDNA片段，收集片段大小在300bp以上的双链cDNA，与含有His标签的T7载体连接，体外包装，得到His标签标记的乳腺癌T7cDNA文库。将文库过镍柱，筛选出ORF。结果：His标签成功插入T7载体中并表达。构建的乳腺癌T7cDNA文库，经测定，原库库容为1.2×107pfu，文库扩增后的滴度为3.37×1010pfu/ml。对文库随机挑取的100个噬菌斑进行PCR鉴定，文库重组体中93%以上的插入片段长度﹥300bp。所建文库经镍柱筛选，ORF重组率达到82%结论：成功改造了T7噬菌体载体，构建的乳腺癌文库质量较高，改造T7载体中的His标签对文库中ORF的筛选效果明显，为ORF的筛选提供了一种简便快速的方法。