【摘 要】
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目的:分析巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA下调后与其他相关成骨及破骨基因的动态关系,探究M-CSF、RANKL在骨改建中的作用。方法:构建下调M-CSF、RANKL shRNA及阴性对照重组质粒,实验分组:M-CSF shRNA及阴性对照重组质粒组,RANKL shRNA及阴性对照重组质粒组,运用LIP3000将重组质粒转染至骨髓干细胞内,48h
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目的:分析巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA下调后与其他相关成骨及破骨基因的动态关系,探究M-CSF、RANKL在骨改建中的作用。方法:构建下调M-CSF、RANKL shRNA及阴性对照重组质粒,实验分组:M-CSF shRNA及阴性对照重组质粒组,RANKL shRNA及阴性对照重组质粒组,运用LIP3000将重组质粒转染至骨髓干细胞内,48h后提取RNA,逆转录,RT-PCR检测相关成骨基因RUNX2、成骨细胞特异性转录因子(OSX)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1)、骨形态发生蛋白(BMP2);破骨基因RANKL、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、白介素-24(IL-24)、肿瘤坏死因子-α(TNFα)、M-CSF mRNA表达变化。结果:M-CSF、RANKL shRNA与阴性对照组相比,实验组RANKL mRNA的表达降低后(P<0.05),IL-1、TNFα、M-CSF下调,IL-6、IL-24基本不变。转染组M-CSF mRNA的表达降低后,成骨基因OSX、OCN表达上调(P<0.05),BMP2、RUNX2、ALP、COL1基本不变。结论:RANKL与IL-1、TNFα、M-CSF因子破骨通路上有联系,与IL-6、IL-24关系尚不明确。M-CSF与OSX、OCN因子在成骨通路上有相互关联,与RUNX2、ALP、COL1、BMP2关系尚不明确。
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