莫匹罗星的菌种选育与发酵工艺的研究

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莫匹罗星由荧光假单孢菌浸没发酵后产生,是一种局部外用抗生素,抗葡萄球菌,链球菌和部分革兰阴性菌,同时与其它抗生素无交叉耐药性,具有简单易用,经济便宜和副反应少的优点。本文以实验室保藏的荧光假单胞菌SIPI-A.1033为出发菌进行菌种选育。通过自然分离,得到高产菌株SIPI-A.1034;将其该菌株在最佳诱变紫外剂量50s下进行第一次紫外诱变,得到高产菌株SIPI-A.1035;接着将该菌株再进行诱变,最终得到高产稳定菌株SIPI-A.1036,其发酵水平比出发菌株SIPI-A.1033提高243%。进行了荧光假单胞菌SIPI-A.1036发酵工艺的优化。优化后的斜面培养基配方(g/L):蛋白胨10.0,牛肉膏3.0,NaCl5.0,琼脂20.0,pH7.4;种子培养基配方(g/L):进口酵母粉5.0,进口蛋白胨10.0,NaCl5.0,pH7.4;发酵培养基配方(g/L):葡萄糖10.0,甘油50.0,冷榨黄豆粉20.0,花生粕粉10.0,玉米油10.0,(NH4)2SO40.5,NH4Cl0.5,亮氨酸1.0,NaCl5.0,玉米浆5.0,CaCO35.0。优化后的斜面培养条件:培养温度为25℃,培养时间为4d;种子培养条件:培养温度为25℃,培养时间为24h;发酵培养条件:初始pH为6.8,温度为25℃,接种量为10%,装料量为30mL,摇床转速为240rpm,培养周期为60h。荧光假单胞菌SIPI-A.1036在优化后的条件下进行摇瓶发酵,其发酵水平提高75%。将荧光假单胞菌SIPI-A.1036用优化后的培养基于10L玻璃发酵罐中培养,考察pH、菌体生长和发酵水平之间的关系。结果显示:发酵至6h时,菌体开始进入对数生长期,此时开始伴随大量的莫匹罗星合成;发酵至24h时,菌浓达到最高,同时莫匹罗星的合成速度开始下降;发酵至24h后,菌体开始进入衰退期,但莫匹罗星的产量仍有少量增加;发酵至70h时,莫匹罗星的产量达到最高,因此,确定在实验室条件下的放罐时间为70h,而摇瓶发酵周期为60h。
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