应用RNA干扰技术抑制HBV S基因的表达

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本文应用RNA干扰技术特异性抑制乙型肝炎病毒S基因的表达。选择两段靶向HBVS基因的特异性siRNA序列,合成两对64nt寡核苷酸,退火成双链后,插入载体H1启动子下游,构建表达干扰性发夹状RNA的质粒phs-9、phs-170,转染CHO-S细胞,ELISA法检测细胞培养上清中HBsAg的表达变化;用尾静脉大容量快速注射法,将phs-9、phs-170分别以5μg、10μg、50μg的不同剂量与50μgpcDNA-HBS质粒混合共同注射实验小鼠,同时设立无关shRNA质粒与pcDNA-HBS质粒共注射对照组和pcDNA-HBS质粒单独注射对照组,ELISA法检测小鼠血清HBsAg、HBsAb,并以免疫组化法检测肝中HBsAg的表达。phs-9和phs-170成功地表达了shRNA,可高水平抑制CHO-S细胞中HBsAg的表达。
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