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目的:由于过继免疫细胞疗法在清除微小残留病(minimal residual disease,MRD)方面具有独特优势,因此越来越多的被研究者应用于临床各恶性肿瘤治疗领域。树突状细胞和细胞因子诱导的杀伤细胞体外共培养细胞即DC-CIK(co-culture of dendritic cell and cytokine-induced killer cells)过继免疫细胞疗法是一种新的治疗策略,由于它具有强大的抗肿瘤效应成为人们关注的重点。本研究组收集、分析2005年5月至2011年5月来我院确诊并接受DC-CIK过继免疫细胞47例儿童急性白血病的临床资料,在国内首次较大规模的探索了该疗法在儿童急性白血病中应用的具体操作流程,评估了DC-CIK过继免疫在儿童急性白血病中应用的疗效及安全性。 方法:DC-CIK过继免疫细胞疗法治疗儿童急性白血病的流程主要为:(1)骨髓单个核细胞采集:按常规方法行髂后上棘骨髓穿刺抽取骨髓液约50ml,加至RPMI1640培养液中,离心,除去血浆,利用羟乙基淀粉沉降法获取骨髓有核细胞,用于树突状细胞培养。(2)外周血单个核细胞的采集:在采集骨髓单个核细胞后约10天进行外周血单个核细胞的采集工作;经股静脉插管建立体外循环通道,再经血细胞分离管道与COBESpectra血细胞分离机相连接开始细胞采集,采集到的细胞经体外分离纯化后用于DC-CIK细胞共培养(调整细胞浓度为1×106/ml,加入IFN-γ,抗CD3单抗、IL-2,IL-1β等细胞因子)。(3)DC-CIK细胞回输:将培养获得的DC-CIK细胞分离纯化后,分2次回输至患儿体内间隔时间为24h。(4)记录患儿在骨髓及外周血单个核细胞采集过程中出现的操作及麻醉相关不良反应、DC-CIK细胞体外培养体系注意事项、患儿在细胞回输过程中出现的相关不良反应以及中位随访41(5～72)个月定期监测心肝肾等重要器官功能并观察有无严重感染、免疫相关疾病及第二肿瘤等的发生。 结果:(1)体外培养获得的DC-CIK细胞总数为7.5～16.2×109,CD3+CD8+细胞的比例由培养前的23.68％增加到培养后的40.32%,CD3+CD56+由培养2.43%培养后增加至33.92%。(2)DC-CIK过继免疫治疗后有44例患儿持续完全缓解(continuous complete remission CCR);治疗前MRD阳性的9例患儿,8例治疗后转阴。(3)单个核细胞采集术中及术后仅局部有轻微疼痛;无麻醉意外、严重出血、低血压休克等严重不良事件发生。(4)61例次DC-CIK细胞培养,仅1例次培养出毛霉菌,重新采集细胞、再次培养后未检出病原体。(5)47例患儿共接受DC-CIK治疗61例次细胞回输,不良反应轻微。细胞回输过程中部分病例出现发热或皮疹,极个别高热患儿伴有寒战,暂停细胞输注,予以对症处理后,体温恢复、寒战症状消失后,顺利回输剩余细胞。(6)47例患儿中位随访41月(5～72月),均获得良好疗效。且未发现心肝肾等损害、血液传染病、感染性疾病、自身免疫性及第二肿瘤疾病等发生。 结论:DC-CIK细胞体外共培养可可使CIK细胞的增殖速率更高和体内外抗肿瘤活性更强,本文首次较大样本量的报道了DC-CIK过继免疫治疗儿童急性白血病的疗效及安全性。DC-CIK过继免疫疗法治疗儿童急性白血病初步取得了满意疗效,该疗法操作流程简便易行、患儿依从性好、安全性好。值得临床进一步深入研究。