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急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)是一种冠状动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)并发血栓形成而导致心肌缺血或梗死的心血管疾病,对病人的生活质量和寿命产生严重影响。血小板的激活、粘附和聚集在动脉血栓的形成中发挥关键作用。大量研究显示,抗血小板药物可有效预防冠状动脉内血栓的形成或加重,从而可预防或减少因冠状动脉阻塞而导致的心血管事件的风险。ACS是一种慢性炎症性疾病,促炎因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)在AS及其斑块破裂过程中发挥重要作用。口服抗血小板药物氯吡格雷(clopidogrel,CLP)是一种前药,本身无药理作用,在体内需经细胞色素P450酶(cytochrome P450,CYP450)两步氧化代谢生成活性代谢产物(clopidogrel active metabolite,CAM)而发挥其抗血小板作用。研究发现,口服吸收的大部分CLP在体内经羧酸酯酶1(carboxylesterase 1,CES1)水解代谢为无活性产物CLP-C,只有小部分经CYP450氧化代谢生成CAM而发挥抗血小板作用。研究还发现,IL-6可抑制多种CYP450酶(包括CYP3A4、CYP2C9、CYP2B6和CYP2C19)的催化活性,同时也可抑制CES1酶的水解活性,而这几种酶都参与了 CLP在体内的代谢灭活或活化过程。可见,体内IL-6的有无或表达水平的高低可通过对这几种CLP相关代谢酶活性的影响进而改变CLP在体内的代谢活化及其抗血小板作用。因未见有任何相关的整体研究报道,本研究拟选用IL-6基因敲除小鼠模型探讨IL-6在CLP体内代谢活化及其抗血小板作用的相对重要性。第一部分 IL-6对单剂量氯吡格雷药代动力学的影响目的:探讨IL-6对CLP在小鼠体内药代动力学的影响。方法:采用C57BL/6背景的IL-6-/-和IL-6+/+小鼠作为研究对象,单剂量灌胃给予 5、10、20 mg/kg CLP 后,在给药后 5、15、30、45、75、120、180 和 300 min于眼眶后静脉丛处取血,血样预处理后进样分析,采用LC-MS/MS法检测CLP、CAM-H4和CLP-C的血药浓度,计算其药代动力学参数。结果:在单剂量CLP给药的各剂量(低、中、高)组,CLP的AUC、Cmax、CL/F和Vd在IL-6-/--和IL-6+/+小鼠之间均无统计学显著性差异(P>0.05);CAM-H4的AUC和Cmax在IL-6-/--和IL-6+/+小鼠之间无统计学显著性差异(P>0.05);CLP-C的AUC在IL-6-/-和IL-6+/+小鼠之间也无统计学显著性差异(P>0.05)。结论:小鼠体内IL-6的有无在整体上对CLP的代谢无显著影响。第二部分 IL-6对单剂量氯吡格雷抗血小板作用的影响目的:探讨IL-6对CLP在小鼠抗血小板作用的影响。方法:(1)采用C57BL/6背景的IL-6-/-和IL-6+/+小鼠作为研究对象,随机分成低、中、高3个剂量组和溶剂对照组,分别灌胃给予单剂量5、10、20 mg/kg CLP,对照组给予溶剂对照。灌胃给药1 h后,麻醉后心脏穿刺取血,采用全血电阻法检测ADP诱导的血小板聚集率,计算CLP对血小板聚集的抑制率。(2)采用C57BL/6背景的IL-6-/-和IL-6+/+小鼠作为研究对象,随机分成低、中、高3个剂量组和溶剂对照组,分别单次灌胃给予5、10、20 mg/kg CLP,对照组给予溶剂对照。灌胃给药1 h后,麻醉后心脏穿刺取血,制备洗涤血小板,以PE-JON/A多克隆抗体和FITC-抗CD41/61抗体进行荧光标记,采用流式细胞术检测ADP诱导的血小板活化程度,计算CLP对血小板活化的抑制率。结果:(1)在CLP单次给药后,IL-6-/-与IL-6+/+小鼠的全血血小板聚集率的抑制均呈剂量依赖性;但给药剂量相同时,IL-6-/-与IL-6+/+组间血小板聚集抑制率无显著差异(P>0.05)。(2)在5、10、20 mg/kg 3个剂量组,CLP对血小板活化的抑制率在IL-6-/-与IL-6+/+小鼠组间无显著差异(P>0.05。结论:IL-6对CLP在小鼠的抗血小板作用无显著影响。