论文部分内容阅读
枳棋Hovenia dulcis(鼠李科),俗称拐枣,为药食两用植物果实。枳棋多糖具有抗急性酒精性肝损伤、抗氧化、免疫调节以及抗肿瘤等生物活性。本文选用枳棋肉质果梗为原料,经提取优化制备枳棋多糖,对多糖进行分离纯化得到均一组分并且对均一组分多糖的理化性质、化学结构以及免疫活性进行了研究,主要研究方法及结果如下：(1)枳棋多糖超声辅助提取工艺的优化：在单因素实验的基础上,采用三因素三水平的BBD响应面优化的方法研究了提取温度、超声功率、提取时间对枳棋多糖提取率的影响,优化条件为：超声温度60℃,超声功率362W,提取时间65min,在此条件下多糖的提取率最高为25.12mg/g。(2)枳棋粗多糖的醇沉分级以及它们的初步结构表征与体外抗氧化活性的研究：枳棋粗多糖HDPs浓缩以后用不同浓度的乙醇(40%、60%和80%)进行醇沉分级得到三个级分HDPs1、HDPs2和HDPs3。研究了分级醇沉片段的理化性质、红外光谱、单糖组成及其体外抗氧化活性,结果表明,HDPs1、HDPs2和HDPs3的糖醛酸含量分别为：2.35±0.03%,11.1±0.05%和2.15±0.08%；蛋白质含量分别为：2.37±0.05%,5.98±0.16%和11.77±0.35%。它们都有较好的DPPH和ABTS自由基的清除活性,但清除能力有所不同；三个级分的红外图谱有相似的吸收峰,GC分析这三个醇沉级分的单糖组成主要由阿拉伯糖、鼠李糖、葡萄糖和半乳糖组成,但含量不同,导致了体外抗氧化活性的差异；HDPs2和HDPs3较HDPsl具有较强的体外抗氧化活性。(3)枳椇多糖的分离纯化以及均一组分多糖的理化性质测定和结构表征：枳棋粗多糖HDPs经纤维素DEAE-52柱层析分离得到三个组分为HDP1、HDP2、 HDP3; HDP3经浓缩,蒸馏水透析,冷冻干燥,再通过葡聚糖凝胶柱S-300进一步分离纯化,经高效液相测定获得的HDP3A为均一组分多糖。通过理化性质测定发现枳棋多糖HDP3A的糖醛酸含量高达45.9%,是一种酸性多糖,没有蛋白质的存在；]3DP3A的结构表征由红外光谱、紫外光谱、单糖组成、HPLC、甲基化、GC-MS和NMR获得；单糖组成实验表明HDP3A多糖由鼠李糖、阿拉伯糖、岩藻糖、半乳糖、木糖、甘露糖和葡萄糖组成；高效液相测得其分子量约为3.65×105Da。通过核磁共振13C-NMR、1H-NMR和HSQC谱分析以及甲基化与GC-MS分析,结果表明其糖苷键的连接方式为：1,4-linked Rhap、1,3,6-linked Manp、1-linked Xylp、1,4-linked GalA、1,6-linked、Fucp、1,4,6-linked Glcp、1-linked Araf,其摩尔比为1.0：0.7：0.4：11.7：0.5：0.5：0.8,其中1,4-linked GalA为主链。(4) HDP3A、HDP3A-0.1、HDP3A-0.5和HDP3A-R的体外免疫调节活性的研究：测定了枳棋多糖四个组分在不同浓度(20-500ug/mL)时对巨噬细胞免疫活性的影响。实验结果证实,四个组分具有不同的增殖活性,其中HDP3A组分对巨噬细胞具有很强的增殖活性,其在低浓度(20ug/mL)时的增殖率已经达到2.38并且超过了正对照LPS；四个组分对巨噬细胞的中性红吞噬活性均具有较好的增强效果,其中HDP3A-0.1和HDP3A-0.5在中低浓度时的吞噬能力很强。