【摘 要】
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背景:新会陈皮是在广东省江门市新会区范围内栽培的芸香科植物茶枝柑(Citrus reticulata‘Chachi’)的干燥果皮,按采收时间可分为柑青皮、微红皮、大红皮。据研究,新会陈皮具有很高的药用价值,如理气健脾、和胃止呕、燥湿化痰等,为历代众多名医家所推崇,被奉为道地药材,广泛应用于临床中药治疗以及食品、保健品、化妆品等领域。据统计,当前新会陈皮种植面积近10万亩,每年产量高达5000多吨。
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背景:新会陈皮是在广东省江门市新会区范围内栽培的芸香科植物茶枝柑(Citrus reticulata‘Chachi’)的干燥果皮,按采收时间可分为柑青皮、微红皮、大红皮。据研究,新会陈皮具有很高的药用价值,如理气健脾、和胃止呕、燥湿化痰等,为历代众多名医家所推崇,被奉为道地药材,广泛应用于临床中药治疗以及食品、保健品、化妆品等领域。据统计,当前新会陈皮种植面积近10万亩,每年产量高达5000多吨。然而新会陈皮的生产种植一般以分散经营为主,由于缺乏药效物质基础研究等系统理论的支撑,在采收、加工、贮藏等方面欠缺统一的指导与管理,导致新会陈皮质量不稳定、难以控制,在很大程度上制约新会陈皮产业的良好发展。因此,本文以新会陈皮为研究对象,综合分析其在不同采收、不同干燥加工、贮藏0~2年过程中黄酮类、挥发油、生物碱类、酚酸类、柠檬苦素类成分的动态变化规律,科学解决其在采收、加工及贮藏中的产业化关键问题,为其质量控制提供一定的参考借鉴。此外,本文还结合相关药理实验研究新会陈皮中多甲氧基黄酮成分的抗鼻咽癌活性,为新会陈皮的开发应用提供科学依据。目的:(1)研究新会陈皮在采收、干燥加工、贮藏0~2年过程中化学成分的动态变化规律。(2)研究新会陈皮中多甲氧基黄酮成分川陈皮素、3,5,6,7,8,3’,4’-七甲氧基黄酮(HMF)对人鼻咽癌细胞5-8F的抑制作用。方法:(1)采用紫外分光光度计(UV)测定新会陈皮样品中的总黄酮、总多甲氧基黄酮、总酚酸含量,并结合高效液相色谱法(HPLC)测定新会陈皮样品中的辛弗林、橙皮苷、阿魏酸、柠檬苦素、川陈皮素、HMF、橘皮素和5-羟基-6,7,8,3’,4’-五甲氧基黄酮(5-HPMF)的含量。(2)采用水蒸气蒸馏法提取新会陈皮样品中的挥发油,并结合气相色谱-质谱联用法(GC-MS)对其挥发性成分进行分离鉴定,筛选出主要挥发性成分进行主成分分析。(3)分别采用CCK8实验、细胞克隆形成实验、流式细胞术实验、Hoechst染色实验、细胞划痕实验、transwell侵袭实验检测川陈皮素、HMF对5-8F细胞增殖凋亡、迁移侵袭能力的影响。结果:(1)在不同采收期新会陈皮中,总含量(总黄酮、总多甲氧基黄酮、总酚酸)及单体成分含量(辛弗林、橙皮苷、柠檬苦素、川陈皮素、HMF、橘皮素、5-HPMF)在总体上随着采收期的增长呈现下降趋势。挥发油含量无明显统计学差异,挥发性醇类成分含量随成熟期的增长呈下降趋势,而醛、酚、酮类成分含量呈先上升后下降的趋势,主成分分析可作为区分柑青皮与微红皮、大红皮的有效方法。(2)在不同干燥加工方式新会陈皮中,黄酮类成分,特别是多甲氧基黄酮在60℃干燥条件下含量明显下降,其他成分含量在各干燥条件下无明显变化。挥发油含量各干燥条件下无明显统计学差异,但在60℃烘干条件下醇、酚、醛、酮、酯类成分含量相对下降,烯类成分含量相对上升;主成分分析可明显区分不同干燥加工方式新会陈皮。(3)在贮藏0~2年新会陈皮中,辛弗林、橙皮苷、柠檬苦素、HMF、5-HPMF含量总体呈下降趋势,川陈皮素、橘皮素总体无明显变化,而阿魏酸贮藏1年后含量明显上升。柑青皮挥发油含量总体呈明显下降趋势,而微红皮与大红皮挥发油含量呈总体变化不明显。挥发性成分数量在贮藏1年后明显下降,而贮藏1~2年间挥发性成分数量变化不大;且柑青皮中醇类成分含量下降,酚、酯类成分含量上升;而微红皮和大红皮中醇、酚、酯、醛成分含量下降,烯类成分含量上升。主成分分析表明贮藏0~2年新会陈皮挥发性成分有所差异。(4)药理实验结果表明,新会陈皮中的多甲氧基黄酮成分(川陈皮素、HMF)作用5-8F细胞后,细胞存活率、迁移和侵袭能力下降,而凋亡率上升,且作用效果均呈剂量依赖性。结论:(1)新会陈皮非挥发性成分含量总体上随着采收期的增长呈现下降趋势,且挥发性成分在柑青皮、微红皮、大红皮中存在一定差异。(2)新会陈皮在60℃烘干条件下易造成黄酮类成分的损失,且与其他干燥条件相比挥发性成分差异较大,故宜采用自然晒干及30℃、45℃低温烘干对新会陈皮进行加工,应避免60℃高温烘干。(3)在贮藏0~2年新会陈皮中,除阿魏酸、川陈皮素、橘皮素外,大多数非挥发性成分含量呈下降趋势。在挥发性成分上也存在有明显差异,其中柑青皮变化较为显著,微红皮与大红皮变化趋势基本一致。故传统上认为新会陈皮“陈久者良”具有一定科学依据。(4)新会陈皮中川陈皮素、HMF对人鼻咽癌细胞5-8F具有抑制增殖、诱导凋亡、抑制迁移和抑制侵袭的作用,且HMF的抗鼻咽癌活性强于川陈皮素。
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