【摘 要】
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为了研究大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）及脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）对奶牛乳腺上皮细胞（BMECs）基质金属蛋白酶（MMPs）表达的影响,以及MMPs与基质金属蛋白酶组织抑制因子（TIMPs）、尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）系统在调控细胞外基质（ECM）代谢的作用,以及MAPK信号通路在其中的作用,本试验分别以10~6CFU/m L热灭活E.
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为了研究大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）及脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）对奶牛乳腺上皮细胞（BMECs）基质金属蛋白酶（MMPs）表达的影响,以及MMPs与基质金属蛋白酶组织抑制因子（TIMPs）、尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）系统在调控细胞外基质（ECM）代谢的作用,以及MAPK信号通路在其中的作用,本试验分别以10~6CFU/m L热灭活E.coli、7.5μg/m L LPS以及E.coli与LPS联合作用于体外培养的BMECs。在作用细胞6、12、24、48 h后提取细胞总RNA和总蛋白,通过q PCR、Western blot检测MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TIMP-1、TIMP-2、u PA、u PAR、PAI-1 m RNA转录水平和相应蛋白表达水平,并通过明胶酶谱试验检测细胞上清液中MMP-2和MMP-9蛋白活性;利用相同方法检测ERK1/2、P38、JNK m RNA及其磷酸化蛋白水平的表达,添加MAPKs通路抑制剂,通过q PCR、Western blot检测MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TIMP-1、TIMP-2、u PA、u PAR、PAI-1 m RNA转录水平和相应蛋白表达水平。结果显示,E.coli和LPS作用于BMECs后,MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TIMP-1、TIMP-2、u PA、u PAR、PAI-1 m RNA转录水平和相应蛋白表达水平均有不同程度上升趋势。MMP-2、TIMP-1、u PA、u PAR、PAI-1 m RNA转录水平在E.coli作用后显著上升,MMP-3、MMP-9、MMP-13、TIMP-2 u PAR m RNA转录水平在E.coli与LPS联合作用后显著上升;MMP-9、MMP-13、TIMP-2蛋白表达水平在LPS作用后显著上升;TIMP-1、u PA、u PAR蛋白表达水平在E.coli作用后显著上升;MMP-9、MMP-13、u PA、u PAR蛋白表达水平在E.coli与LPS联合作用后显著上升;明胶酶谱试验结果显示,三个作用组MMP-2蛋白活性在不同时间均显著上升;E.coli、E.coli与LPS联合作用12 h时MMP-9蛋白活性显著上升。热灭活E.coli和LPS促进BMECs ERK1/2、P38和JNK m RNA的表达及其磷酸化蛋白的表达,MAPKs特异性抑制剂减弱E.coli和LPS诱导的MMP-1、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TIMP-2、u PA、PAI-1蛋白的表达。本研究表明,热灭活E.coli菌液和LPS诱导BMECs中MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TIMP-1、TIMP-2、u PA、u PAR和PAI-1的表达,并激活u PA系统参与调控MMPs的表达,MAPKs信号通路参与调控MMPs/TIMPs及uPA系统的表达。
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