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目的:研究龙藤通络凝胶(Longtengtongluogel，LTTLgel)外用对Walker256乳腺癌骨癌痛大鼠瞬时感受器电位离子通道(Transientreceptorpotentialchannels，TRP)TRPV1、TRPA1、TRPV4表达的影响，研究龙藤通络凝胶治疗癌痛的中枢机制。
方法:
实验共分为三个部分，一、龙藤通络凝胶对骨癌痛大鼠一般状况和痛觉行为学的影响;二、TRP通道拮抗剂对骨癌痛大鼠痛觉行为学的作用;三、免疫荧光法检测龙藤通络凝胶对骨癌痛大鼠DRG中TRPV1、TRPA1、TRPV4蛋白表达的影响。
实验一:150～170克雌性大鼠随机分为假手术+空白凝胶组、骨癌痛模型+空白凝胶组和骨癌痛模型+龙藤通络凝胶组，每组10只，给予龙藤通络凝胶或空白凝胶外用，在造模前及造模后(0～21天)观察大鼠一般状况、体质量、机械痛觉、热痛觉等。
实验二:骨癌痛模型大鼠随机分为7组，即骨癌痛模型+生理盐水组、骨癌痛模型+TRPV1拮抗剂10μg组、骨癌痛模型+TRPV1拮抗剂2μg组、骨癌痛模型+TRPA1拮抗剂10μg组、骨癌痛模型+TRPA1拮抗剂2μg组、骨痛痛模型+TRPV4拮抗剂10μg组、骨癌痛模型+TRPV4拮抗剂2μg组，每组8只。将不同剂量TRP通道拮抗剂在造模后17～20天鞘内注射，观察鞘内给药前后骨癌痛大鼠机械通觉和热痛觉的变化。
实验三:免疫荧光法检测龙藤通络凝胶对Walker256乳腺癌细胞大鼠胫骨骨癌痛模型背根神经节(Dorsalrootganglion，DRG)中TRPV1、TRPA1和TRPV4蛋白的表达水平。实验分为假手术+空白凝胶组、骨癌痛模型+空白凝胶组和骨癌痛模型+龙藤通络凝胶组。龙藤通络凝胶或空白凝胶造模后1～21天外用，各组分别在造模后第7、14和21天解剖5只大鼠，免疫荧光法检测各组大鼠背根神经节TRPV1、TRPA1和TRPV4蛋白的表达。
结果:
(1)龙藤通络凝胶对骨癌痛大鼠体质量的影响结果显示:造模后第17～21天，与空白凝胶组相比，龙藤通络凝胶能显著增加骨癌痛大鼠体重，差异有统计学意义(P＜0.01)。
(2)龙藤通络凝胶对骨癌痛大鼠行为学的影响显示:龙藤通络凝胶组模型侧机械痛觉缩足阈值和热痛觉缩足潜伏期第17～21天时显著高于空白凝胶组(P＜0.05，P＜0.01)。造模后各组健侧机械痛觉缩足阈值和热痛觉缩足潜伏期均无明显变化。
(3)TRP通道拮抗剂对骨癌痛大鼠行为学的影响显示:造模后第17～20天，与生理盐水比较，10μgTRPV1、TRPA1、TRPV4拮抗剂椎管内注射可明显提高骨癌痛大鼠同侧机械痛觉缩足阈值(P＜0.01)和热痛觉缩足潜伏期(P＜0.01)，改善机械痛觉和热痛觉。
(4)免疫荧光法检测龙藤通络凝胶对瞬时受体电位通道TRPV1、TRPA1和TRPV4表达水平的调控显示:TRPV1、TRPA1和TRPV4可在胫骨肿瘤细胞造模后14～21天在背根神经节表达升高，龙藤通络凝胶外用可降低骨癌痛大鼠背根神经节TRPV1、TRPA1和TRPV4的表达。造模后第7天，各组之间TRPV1、TRPA1和TRPV4表达水平均无明显差异;造模后第14～21天，与假手术+空白凝胶组相比，骨癌痛模型+空白凝胶组和骨癌痛模型+龙藤通络凝胶组背根神经节TRPV1、TRPA1和TRPV4明显升高(P＜0.01);造模后第21天，与空白凝胶相比，龙藤通络凝胶克降低背根神经节TRPV1、TRPA1和TRPV4的表达(P＜0.01)，差异均有统计学意义。
结论:
(1)龙藤通络凝胶通过改善骨癌痛大鼠的行为体征，增加造模后大鼠体质量来改善Walker256乳腺癌骨癌痛大鼠一般状况。
(2)龙藤通络凝胶外用可显著改善Walker256乳腺癌骨癌痛大鼠机械痛和热痛。
(3)骨癌痛大鼠TRPV1、TRPA1、TRPV4的表达增加，拮抗剂可以改善疼痛，抑制背根神经节TRPV1、TRPA1、TRPV4的表达水平可能是治疗癌痛的中枢机制之一。
(4)龙藤通络凝胶外用治疗癌痛的中枢机制可能是通过抑制Walker256乳腺癌骨痛痛大鼠背根神经节TRPV1、TRPA1、TRPV4蛋白表达来实现，进而发挥止痛作用。