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鸭腺病毒(Duck Adenovirus)属于腺病毒科腺胸腺病毒属(Atadenovirus),在临床上可引起鸡、鸭、鹅等家禽的产蛋下降综合征(Egg Drop Syndrome),所以也叫产蛋下降综合征病毒或者EDS病毒。产蛋下降综合征是1976年荷兰学者VanEck首次报道,所以也称EDS76病毒。现已在世界上大部分国家分离到多株病毒。之前的观点认为鸭只是EDS76的储藏宿主,不引起产蛋鸭发病,但1984年Bartha等从产蛋下降的病鸭中分离到了病毒,国内外有关鸭产蛋下降综合征研究开始增多,各种研究表明鸭感染EDS76也会引起产蛋率严重下降。本实验从实验室保存的EDS76入手,制备出高免鸭抗EDS76抗体和兔抗EDS76抗体,建立了夹心间接ELISA检测EDS76的方法,并与HA检测法和常规PCR检测法在敏感性上进行了比较。1.检测鸭腺病毒的夹心间接EL ISA方法的建立本实验从鸭源减蛋综合征病毒AV71株抗原(EDS76)入手,用11日龄鸭胚进行复苏,增殖后收取尿囊液,用血凝和血凝抑制实验、PCR方法方法进行检测,确定其为EDS76。然后进行传代培养至第9代,其血凝价达到13-14且稳定后,用第9代EDS76分别免疫青年雄性兔子和产蛋初期母鸭,制备高免的鸭抗EDS76抗体和兔抗EDS76抗体,用饱和硫酸铵法提纯IgG。筛选的鸭抗EDS76IgG最佳包被浓度是1：40,最佳包被时间是37℃120 min,最适合的封闭液是1%的小牛血清白蛋白(BSA-PBST),最佳封闭时间是37℃60min, EDS76抗原与鸭抗EDS76IgG最佳作用时间是37℃60 min,兔抗EDS76IgG的稀释浓度为1：160,兔抗EDS76 IgG与EDS76抗原最佳作用时间为37℃60min, HRP标记的羊抗兔酶标抗体最佳稀释浓度是1：5000,酶标抗体的最佳作用时间是37℃90 min,显色液的最佳作用时间为37℃10 min。经过重复性实验、特异性实验和交叉性实验等检测,证明该方法是一种敏感、特异、快速、操作方便的方法。2.夹心间接ELISA检测鸭腺病毒抗原的应用应用建立起来的夹心间接ELISA对雅安周边草坝、上里、浦江、新津及眉山五个地方蛋鸭场105份样品进行检测,结果显示有12份样品为阳性,阳性率为11.4%。对产蛋初期母鸭进行攻毒后,产蛋率下降明显,攻毒后检测鸭体内的抗体和抗原,攻毒后7 d,抗体HI效价已经达到11,14 d后HI抗体效价基本稳定在13,21 d后HI抗体效价已略有下降。攻毒21d后,取鸭子血液及心、肝、脾、肺、卵巢、输卵管等组织器官,用建立的夹心间接ELISA方法和血凝实验进行检测,除心脏和肺脏外均测到了EDS76抗原。说明产蛋鸭一旦感染了EDSV,将长期带毒排毒。