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目的:本研究旨在观察脑梗死后Shh信号通路的变化规律及针刺干预效应,从促进神经修复与再生的角度深入揭示针刺治疗脑梗死的分子机制。 方法:以Longa腔内线栓法复制大鼠脑梗死模型为研究对象,分为空白组、假手术组、模型组和针刺组,其中后三组按照术后1H、3H、6H、9H、12H、24H、3D、7D和12D各分为9个时相组,共28组,每组10只动物。以神经功能缺损评分法评估各组动物的神经缺损和恢复情况;采用氯化三苯基四氮唑染色法观测脑梗死后脑组织缺血体积变化;选取免疫组化法检测脑梗死后海马区突触素SYP及微管相关蛋白MAP2、DCX的变化规律和电针干预效应;应用RT-PCR检测各组动物脑梗死后Shh信号通路相关因子Shh、Ptched-1、Smo及Gli1的mRNA表达的变化规律和电针干预效应。 结果: 1.针刺对神经功能缺损评分的影响:MCAo模型后24H,模型组大鼠NSS评分呈上升趋势,至24H评分达最高值后呈下降趋势;针刺组大鼠NSS评分变化趋势与模型组大致相同,各时相神经功能缺损评分均显著低于同时相模型组,且在6H后有显著性差异。 2.针刺对脑缺血体积的影响:空白组与假手术组大鼠脑组织TTC染色结果呈正常深红色,未见明显的梗死灶。MCAo后6H,模型组大鼠脑缺血体积均呈上升趋势,至24H达到峰值后逐渐下降;针刺组脑缺血体积变化趋势与模型组大致相同,各时相脑缺血体积均小于同时相模型组,且两组在12H、24H、3D、7D和12D时相比差异有统计学意义。 3.针刺对突触素SYP表达的影响:空白组与各时相假手术组大鼠脑组织SYP蛋白ROD值对比差异无统计学意义。模型组和针刺组MCAo大鼠SYP蛋白ROD值在3H后均下降,于24H降低至最低点后缓慢上升,在6H后ROD值均低于空白组和同时相假手术组。针刺组各时相ROD值均高于同时相模型组,且两组在7D、12D时相比差异有统计学意义。 4.针刺对微管相关蛋白 MAP2表达的影响:空白组与各时相假手术组大鼠脑组织MAP2蛋白ROD值和阳性表达面积对比差异无统计学意义。模型组与针刺组MCAo大鼠MAP2蛋白ROD值和阳性表达面积均在1H后下降,于24H降低至最低点后缓慢上升,ROD值和阳性表达面积在6H后均低于空白组和同时相假手术组。针刺组各时相ROD值均高于同时相模型组,且两组在24H、3D、7D和12D时相比差异有统计学意义;针刺组各时相阳性表达面积均高于同时相模型组,在9H后相比差异有统计学意义。 5.针刺对双皮质素 DCX蛋白表达的影响:空白组与各时相假手术组大鼠脑组织DCX蛋白ROD值对比差异无统计学意义。针刺组和模型组MCAo大鼠DCX蛋白ROD值均在1H后下降,于24H降低至最低点后于3D后缓慢上升,ROD值在6H后均低于空白组和同时相假手术组。针刺组各时相ROD值均高于同时相模型组,且两组在24H、3D、7D和12D时相比差异有统计学意义。 6.针刺对Shh通路相关因子表达的影响:各时相假手术组Shh通路相关因子mRNA表达与空白组对比差异无统计学意义。模型组与针刺组Shh通路相关基因Shh、Ptch、Smo和GLI1 mRNA表达均呈现“上升-下降-上升”的趋势,在1H后呈上升趋势,至12H达到高峰后逐渐下降至3D时达最低点,7D后再次上升,其中: ①模型组各时相Shh mRNA RQ值在9H、12H和12D时与空白组和同时相假手术组对比差异有统计学意义。针刺组各时相RQ值在6H、9H、12H、24H、7D和12D时与空白组和同时相假手术组对比差异有统计学意义。针刺组各时相RQ值均高于同时相模型组,且两组在12H、24H、7D和12D时相比差异有统计学意义。 ②模型组各时相Ptch mRNA RQ值在6H、9H、12H和12D时与空白组及同时相假手术组对比差异有统计学意义。针刺组各时相RQ值在6H、9H、12H、24H、7D和12D时与空白组及同时相假手术组对比差异有统计学意义。针刺组各时相RQ值均高于同时相模型组,且两组在12H、24H、7D和12D时相比差异有统计学意义。 ③模型组各时相Smo mRNA RQ值在9H、12H和12D时与空白组和同时相假手术组对比差异有统计学意义。针刺组各时相RQ值在6H、9H、12H、24H、7D和12D时与空白组和同时相假手术组对比差异有统计学意义。针刺组各时相RQ值均高于同时相模型组,且两组在12H、24H、7D和12D时相比差异有统计学意义。 ④模型组各时相Gli1 mRNA RQ值在6H、9H、12H和12D时与空白组及同时相假手术组对比差异有统计学意义。针刺组各时相RQ在6H、9H、12H、24H、7D和12D时与空白组及同时相假手术组差异有统计学意义。针刺组各时相RQ值均高于同时相模型组,且两组在12H、24H、7D和12D时相比差异有统计学意义。 结论: 1.针刺可改善MCAo模型大鼠神经功能缺损症状,降低MCAo模型大鼠脑缺血体积。 2.针刺可减轻梗死周围区突触以及轴突、树突的损伤,促进突触以及轴突、树突的生长; 3.针刺可显著促进MCAo模型大鼠12H、24H、7D及12D的Shh信号通路上游及下游相关因子的上调表达。