【摘 要】
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目的:本课题旨在研究健康者及IgA肾病患者尿液外泌体中miR-21、miR-223、miR-374b相对表达量的差异性,以及IgA肾病患者尿液外泌体中miR-21、miR-223、miR-374b表达量与性别、年龄、血清白蛋白、血肌酐、血尿素氮、24小时尿蛋白排泄量、24小时尿微量白蛋白排泄量、肾小球滤过率、尿红细胞及病理严重程度的相关性,以探索判断IgA肾病病情的新标志物,为IgA肾病非创伤诊断
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目的:本课题旨在研究健康者及IgA肾病患者尿液外泌体中miR-21、miR-223、miR-374b相对表达量的差异性,以及IgA肾病患者尿液外泌体中miR-21、miR-223、miR-374b表达量与性别、年龄、血清白蛋白、血肌酐、血尿素氮、24小时尿蛋白排泄量、24小时尿微量白蛋白排泄量、肾小球滤过率、尿红细胞及病理严重程度的相关性,以探索判断IgA肾病病情的新标志物,为IgA肾病非创伤诊断和病情评估提供新思路。方法:（1）实验分为两组,IgA肾病组和健康对照组。收集健康者与IgA肾病患者晨起尿液,离心及浓缩后使用外泌体提取试剂盒分离尿液中外泌体,一部分使用RIPA细胞裂解液提取外泌体中蛋白,通过Western Blotting鉴定外泌体;另一部分利用透射电子显微镜观察外泌体形态。（2）氛-氯仿法提取外泌体中总RNA,q RT-PCR检测健康者及IgA肾病患者尿液外泌体中miR-21、miR-223、miR-374b的表达量,并分析健康者与IgA肾病患者尿液外泌体中miR-21、miR-223、miR-374b相对表达量的差异性。（3）收集IgA肾病患者性别、年龄、血清白蛋白、血肌酐、血尿素氮、24小时尿蛋白排泄量、24小时尿微量白蛋白排泄量、肾小球滤过率、尿红细胞及肾脏病理结果等相关数据。Spearman相关分析尿液外泌体中miR-21、miR-223、miR-374b表达量与性别、年龄、血清白蛋白、血肌酐、血尿素氮、24小时尿蛋白排泄量、24小时尿微量白蛋白排泄量、肾小球滤过率、尿红细胞及病理严重程度的相关性。结果:（1）分离20例健康者及46例IgA肾病患者尿液外泌体,Western Blotting检测外泌体的标志性蛋白Tsg101为阳性;透射电子显微镜下观察外泌体的形态结构为略小于100nm的具有清晰膜结构的茶托样结构。（2）q RT-PCR检测健康者及IgA肾病患者尿液外泌体中miR-21、miR-223、miR-374b表达量,发现IgA肾病患者尿液外泌体中miR-21、miR-223、miR-374b的相对表达量较健康者高,差异倍数分别为1.87倍、6.90倍、2.97倍;初诊IgA肾病者与经治疗后IgA肾病患者尿液外泌体中的miR-21、miR-223、miR-374b表达量无明显差异。（3）miR-21表达量与血肌酐、血尿素氮及24小时尿蛋白排泄量呈正相关,miR-223表达量与血肌酐、血尿素氮及24小时尿微量白蛋白排泄量呈正相关,miR-374b表达量与血肌酐、24小时尿蛋白及24小时尿微量白蛋白排泄量呈正相关;miR-21及miR-374b的相对表达量与镜下系膜细胞增生、内皮细胞增生、节段性硬化或粘连、肾小管萎缩或肾间质纤维化、细胞和（或）细胞新月体形成病变程度呈正相关;miR-223的相对表达量与镜下系膜细胞增生、节段性硬化或粘连、肾小管萎缩或肾间质纤维化、细胞和（或）细胞新月体形成病变程度呈正相关。结论:IgA肾病患者尿液外泌体中miR-21、miR-223、miR-374b相对表达量较健康者高,miR-21、miR-223、miR-374b的表达量与血肌酐、血尿素氮、24小时尿蛋白排泄量、24小时尿微量白蛋白排泄量及病理严重程度呈正相关,可为IgA肾病患者病情病情判断提供一条新的思路。
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