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目的本研究将内脂素基因敲除小鼠结合血管紧张素(AngⅡ)微型渗透释放泵,从细胞水平与分子水平上观察内脂素对心肌肥大的影响,从而探讨内脂素在心肌肥大中发挥的作用。方法1、实验分组SPF级别的8周龄、体重在18-26g的雄性C57BL/6小鼠共计16只,随机分为2组:分别为野生组(WT组)和野生血管紧张素组(WT AngⅡ组),每组各8只;同样SPF级别的8周龄、体重在18-26g的雄性内脂素基因敲除小鼠共计16只,随机分为2组:分别为visfatin-/-组(KO组)和visfatin-/-血管紧张素组(KO AngⅡ组),每组各8只。2.建立心肌肥大模型所有小鼠均在皮下放置微型释放泵。WT组和KO组小鼠以1.3ml/kg/天的速度持续性输入生理盐水,而WT AngⅡ组和KO AngⅡ组小鼠以1.3ml/kg/天的速度持续性输入浓度为5mg/ml的AngⅡ。3.取材和方法小鼠在标准条件下喂养4周,在测量小鼠的体重后,将小鼠处死,同时快速取出小鼠的心脏,用4摄氏度的生理盐水冲洗清洁3-4遍,无菌纱布吸干其中水分,并称取小鼠的心脏的重量,计算心脏质量指数(HMI)。将小鼠的心室切为两部分,上半部分保存于零下80摄氏度的冰箱内,运用RT-PCR技术检测小鼠心肌细胞表达的β-MHC、BNP水平。下半部分浸泡于福尔马林溶液中,经石蜡包埋、切片,脱蜡后应用于HE染色和马松染色,光学显微镜下观察并截取多个不同视野,运用Image J测量和分析以获得小鼠心肌细胞的横截面积和小鼠心肌细胞的胶原纤维的容积分数。4.统计学分析应用Prism5.0软件行统计学分析,计量资料以均数±标准差(`x±S)的形式表示,不同组别之间比较应用独立样本t检验,认为P<0.05是差异有统计学意义。结果1.心脏质量指数(HMI)(1)两AngⅡ组的HMI均大于其对照组,且有统计学意义。KO组/KO AngⅡ组:(4.18±0.24)/(5.09±0.47)mg/g(P<0.05),WT组/WT AngⅡ组(4.18±0.21)/(5.11±0.59)mg/g(P<0.05);(2)KO组与WT组比较,差异无统计学意义,KO组/WT组:(4.18±0.24)/(4.18±0.21)mg/g(P>0.05);(3)KO AngⅡ组与WT AngⅡ组比较,虽然KO AngⅡ组的HMI小于WT AngⅡ组,但两者之间差异无统计学意义,KO AngⅡ组/WT AngⅡ组(5.09±0.47)/(5.11±0.59)mg/g(P>0.05)。2.心肌细胞的横截面积(1)两AngⅡ组小鼠心肌细胞横截面积均大于其对照组,KO组/KO AngⅡ组:(332.90±134.00)/(407.50±171.40)um~2(P<0.05),WT组/WT AngⅡ组:(327.10±112.70)/(415.60±197.50)um~2(P<0.05);(2)KO组与WT组比较,小鼠心肌细胞横截面积无明显差异,KO组/WT组:(332.90±134.00)/(327.10±112.700)um~2(P>0.05);(3)KO AngⅡ组与WT AngⅡ组比较,KO AngⅡ组比WT AngⅡ组心肌细胞横截面积减小,但是两者之间差异无统计学意义,KO AngⅡ组/WT AngⅡ组:(407.50±171.40)/(415.60±197.50)um~2(P>0.05)。3.心肌细胞胶原纤维的容积分数(1)AngⅡ组心肌细胞胶原纤维容积分数均大于其对照组,WT组/WT AngⅡ组:(5.32±1.99)/(15.26±3.02)%(P<0.05),KO组/KO AngⅡ组(5.31±1.90)/(15.16±3.21)%(P<0.05);(2)KO组与WT组比较,心肌细胞胶原纤维的容积分数无明显差异,KO组/WT组:(5.31±1.90)/(5.32±1.99)%(P>0.05);(3)KO AngⅡ组与WT AngⅡ组比较,KO AngⅡ组的心肌细胞胶原纤维容积分数略小于WT AngⅡ组,但两者之间差异无统计学意义,KO AngⅡ组/WT AngⅡ组:(15.16±3.21)/(15.26±3.02)%(P>0.05)。4.心肌细胞β-MHC的m RNA表达水平(1)KO组心肌细胞β-MHC的m RNA表达水平与WT组相比无明显差异(P>0.05)。(2)KO AngⅡ组心肌细胞β-MHC的m RNA表达水平大于KO组,且差异有统计学意义(P<0.05)。WT AngⅡ组心肌细胞β-MHC的m RNA表达水平大于WT组,且差异有统计学意义(P<0.05)。(3)KO AngⅡ组心肌细胞β-MHC的m RNA表达水平较WT AngⅡ组相比减少,但无显著差异(P>0.05)。5.心肌细胞BNP的m RNA表达水平(1)KO组心肌细胞BNP的m RNA表达水平与WT组相比无明显差异(P>0.05)。(2)KO AngⅡ组心肌细胞BNP的m RNA表达水平大于KO组,且差异有统计学意义(P<0.05)。WT AngⅡ组心肌细胞β-MHC的m RNA表达水平大于WT组,且差异有统计学意义(P<0.05)。(3)KO AngⅡ组心肌细胞BNP的m RNA表达水平较WT AngⅡ组相比减少,但差异没有统计学意义(P>0.05)。结论1单纯的内脂素基因敲除对小鼠心肌细胞无明显影响。2血管紧张素Ⅱ可诱导小鼠心肌细胞肥大,其表现为小鼠心脏质量指数增大,心肌细胞的横截面积增大,细胞内的胶原纤维增多以及心肌细胞的BNP、β-MHC表达增加。3内脂素基因敲除对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大进程无明显改变。