【摘 要】
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在昆虫中,20-羟基蜕皮酮(20E)通过激活一系列转录因子来介导昆虫生长发育并调节蜕皮过程。已有研究证实,在昆虫蜕皮过程中20E可以促进几丁质的合成,但参与调控几丁质合成的具
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在昆虫中,20-羟基蜕皮酮(20E)通过激活一系列转录因子来介导昆虫生长发育并调节蜕皮过程。已有研究证实,在昆虫蜕皮过程中20E可以促进几丁质的合成,但参与调控几丁质合成的具体原因仍不清楚。Broad Complex(Br-C)作为20E信号通路中的一个重要基因,在昆虫生长过程中起着至关重要的作用。然而,Br-C基因是否影响昆虫几丁质的合成以及该转录因子如何调节几丁质生物合成的机制尚不清楚。本研究以舞毒蛾(Lymantria dispar)为试虫,成功克隆了舞毒蛾Br-C基因,并对其进行了生物信息学分析。通过RNA干扰(RNAi)实验分析了LdBr-C对舞毒蛾幼虫生长发育及几丁质的合成与代谢过程中的功能。研究结果表明,LdBr-C基因全长1431 bp,编码477个氨基酸(aa),在N’端包含一个共同的Brcore结构域(391 aa),在C’端包含—对独特的锌指结构域(56 aa),具有两个特征性的C2H2基序(CXXC和HXXXXH)。系统发育分析表明,LdBr-C与棉铃虫(Helicoverpa armigera)的Br-C基因具有最高的同源性,氨基酸相似性达到83.12%。时空表达结果显示LdBr-C在整个幼虫期和蛹期均有表达,且在预蛹期和蛹期表达量较高。此外,外源20E可以显著诱导LdBr-C基因的表达,而dsRNA显著降低了LdBr-C的表达。生物测定结果表明,RNAi介导的LdBr-C基因沉默导致幼虫发育畸形,体重明显减轻,死亡率达到67.18%。实时荧光定量结果显示,LdBr-C基因沉默显著下调了与几丁质合成和代谢有关的八个关键基因(LdTre1,LdTre2,LdG6PI,LdUAP,LdCHS1,LdCHS2,LdTPS 和 LdCHT)的转录水平,并显著降低舞毒蛾幼虫中肠和表皮中几丁质的含量。综上所述,本研究结果表明LdBr-C基因在舞毒蛾幼虫的生长发育及调节了几丁质的合成中起着重要作用。
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