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单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes, LM)在自然环境中分布广泛,容易污染动物性食品。污染的食品被人食用后可造成胃肠炎、脑膜炎、肺炎、败血病及孕妇流产等,造成严重的危害及高的病死率。因此,LM被认为是一种具有重要公共卫生学意义的食源性致病菌,加强食品中LM的监测至关重要。本研究用重组InlA蛋白作为免疫原,制备了抗InlA的单克隆抗体；以灭活菌体作为免疫原制备了抗LM多克隆抗体。以胶体金标记单克隆抗体作为捕获抗体,多克隆抗体作为检测抗体,制备了快速检测LM的胶体金试纸条。用单克隆抗体包被裸磁珠制备了免疫磁珠,用来富集样品中的LM,并且用PCR方法对制备的免疫磁珠进行评价。1.重组InlA蛋白的制备利用LM模式菌株(CCTCCAB97021)基因组DNA作为模板,PCR扩增inlA全基因；经抗原表位分析,选取免疫原性好的下游1200bp目的片段进行二次PCR扩增,将目的基因进行克隆,构建pET-32a-InlA原核表达质粒,在E.coli BL21中进行表达,采用镍柱亲和层析法对包涵体进行纯化,获得重组InlA蛋白。2. InlA蛋白单克隆抗体的制备用重组InlA蛋白对BALB/c小鼠进行免疫,采用杂交瘤细胞融合技术,筛选到2株特异性分泌抗InlA蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株484和4E1,制备腹水进行纯化获得单克隆抗体。2株单抗的特异性较高,与大肠杆菌0157:H7、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和其它非LM李斯特菌均无交叉反应。抗体亚类均为IgGl亚型；腹水效价均为1：6.4×104。3.抗LM多克隆抗体的制备用热灭活的LM免疫新西兰大白兔制备抗LM多克隆抗体。其效价达到1：32000,先用饱和硫酸铵粗提,再用Sephadex G-200进一步纯化,获得多克隆抗体。4.检测LM的胶体金试纸条的制备以金标484单抗作为捕获抗体,多克隆抗体作为检测抗体,制备LM胶体金检测试纸条。其灵敏度为2.4×105CFU/mL;特异性好,不与英诺克李斯特菌、格氏李斯特菌、链球菌、屎肠球菌、鼠伤寒沙门菌、EHEC O157:H7反应,与金黄色葡萄球菌有微弱的交叉反应；检测时间短,仅5-10min就能观察结果；人工模拟样品的灵敏度为4.0×106CFU/mL;4℃的保存期可以达到120d以上。5.免疫磁珠的制备利用化学共沉淀法合成磁性Fe304裸磁珠,以1%醋酸溶解壳聚糖进行包被,用1%戊二醛作为交联剂,用250μg/mL单克隆抗体与其进行偶联,用10%的脱脂奶粉进行封闭,即制得免疫磁珠。用PCR方法对免疫磁珠进行评价,结果显示免疫磁珠富集细菌的效果较好,并且磁珠不影响PCR反应。