奇异变形杆菌与A亚群禽白血病病毒在SPF鸡中共感染的研究

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与禽白血病混合感染的病原较多,使得鸡群疾病防控和净化更复杂困难,引起了人们对该病的重视。本试验对鸡胚卵黄中分离到的奇异变形杆菌进行分离鉴定,同时对奇异变形杆菌和ALV-A在SPF鸡中共感染进行研究。1.本研究从死亡鸡胚的卵黄中分离到的疑似奇异变形杆菌的菌株,通过细菌培养、革兰氏染色镜检以及生化特性测定以及16S r RNA基因比对对分离菌进行鉴定。结果显示,分离菌的培养特性、革兰氏染色镜检以及生化特性符合奇异变形杆菌的特性,初步鉴定为奇异变形杆菌;应用PCR方法扩增出1465 bp的16S rRNA基因片段。经BLAST对比分析表明,与其同源性最高的均为奇异变形杆菌各株系的16S rRNA序列,同源性高达99%以上。检测结果表明,该分离菌为鸡奇异变形杆菌。2.将分离并鉴定的鸡奇异变形杆菌,经传代培养、灭活、调整抗原浓度、无菌检测以及染色等方法,制备该菌的凝集抗原,并利用该抗原与弗氏佐剂(Freund’s Adjuvant)混合免疫兔子制备该菌的标准阳性血清。结果显示,用甲醛灭活细菌制备的抗原比加热灭活的灵敏度要高,且抗原最佳灭活条件为0.5%的甲醛溶液(24 h);凝集抗原的最适浓度为8.05×109 CFU/mL;最佳的染色液为草酸铵结晶紫染色液。制备的该菌的阳性血清经试管凝集试验测得效价可达1:512。3.建立SPF雏鸡感染奇异变形杆菌和ALV-A的免疫抑制模型。将120只14日龄SPF鸡随机分4组,各组隔离饲养,分别为ALV-A组、PM组、PM+ALV-A组,空白对照组。每组鸡于第1、2、3、4、5、6周随机取3只,检测相关指标。结果显示,感染后第2-3周,各感染组均有部分鸡出现临床症状,共感染组死亡率(26.7%)要高于ALV-A组(20%)、PM组(16.7%)。各感染组胸腺、脾脏、法氏囊等免疫器官指数不同程度的低于对照组,并且共感染组加重对免疫器官的损伤程度。感染鸡在6周龄,肉眼观察内脏器官无明显的肿大或肿瘤结节,病理组织学观察到在肝脏、脾脏、胸腺、法氏囊等器官内呈现淋巴细胞样瘤细胞和出血现象。外周血T淋巴细胞数检测、鸡白细胞介素(IL-2)和干扰素(IFN-γ)检测结果显示,单感染和共感染组的CD4+、CD8+T细胞数、白细胞介素(IL-2)和干扰素(IFN-γ)的分泌量均低于对照组,并且共感染时免疫抑制程度最明显。鸡体内P27抗原和ALV-A抗体水平波动很大,呈现一定的负相关。该菌是奇异变形杆菌,研制的凝集抗原可用于鸡奇异变形杆菌感染或免疫后抗体的检测。奇异变形杆菌与ALV-A具有协同致病作用,共感染对SPF鸡的危害要比单感染严重。
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