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目的:肾脏疾病以炎症细胞浸润及纤维化为主要特征,而肾脏间质纤维化被认为是导致终末期肾功能衰竭的最终途径,其间伴有肾小球系膜细胞和成纤维细胞活化、炎症细胞浸润、细胞凋亡以及基底膜扩张等,但根本原因还是炎症反应的发展。而作为炎症细胞中重要成员的肥大细胞(mast cell, MC)可能通过多种途径在肾间质纤维化中起着不可忽视的作用。目前中药抑制肾间质纤维化作用机制研究中尚未开展对肥大细胞作用的相关研究。研究评价延肾口服液(YSH)抑制肥大细胞脱颗粒对肾间质纤维化的疗效,有可能从肥大细胞环节为肾纤维化的防治提供一条新的途径,为临床开发预防和治疗肾间质纤维化提供实验依据。本实验研究自组中药复方YSH抑制UUO模型大鼠肾间质纤维化作用,并从肥大细胞角度探讨YSH对肾间质纤维化抑制作用的可能机制。方法:(1)研究模型及动物分组:采用大鼠单侧输尿管梗阻(unilateral ureteric obstruction, UUO)模型作为肾间质纤维化研究模型。随机选取75只健康雄性SD大鼠作为研究样本,体重150±20g,分为以下5组(每组15只):UUO组(模型对照);手术对照组(假手术组/Sham组);UUO+贝那普利(阳性对照)组;UUO+低剂量YSH治疗组;UUO+高剂量YSH治疗组。在无菌条件下行左侧输尿管结扎术。手术对照组开腹后,分离出左侧输尿管,但不结扎,其余步骤相同。术前1日开始给药,UUO组、手术对照组给予2.1ml/d生理盐水灌胃,每日一次,贝那普利组给予2.5ml/d,YSH高、低剂量治疗组分别给予2.1ml/d、1.05ml/d灌胃,于手术后六周(第42天)收集标本。(2)病理学检测及评价:取梗阻侧肾组织行HE染色观察肾间质病理学变化,采用Banff标准评定肾间质纤维化程度。(3)纤维化肾组织中肥大细胞数量和分布特点研究:采用甲苯胺兰染色和免疫组化方法检测肾组织中类胰蛋白酶(Tryptase,肥大细胞膜表面特异表达)表达。(4)纤维化肾组织中肥大细胞超微结构和脱颗粒状态研究:借助透射电镜下观察纤维化肾组织中肥大细胞超微结构特点。(5)肾组织中转化生长因子-β1 (TGF-β1)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平检测:采用免疫组化方法检测纤维化肾组织TGF-β1和α-SMA的表达变化,并进行半定量病理图像分析。(6)实验大鼠肾功能检测及24小时尿蛋白定量测定:留取血、尿标本做血肌酐(SCR)、尿肌酐(UCR)、血尿素氮(BUN)、尿尿素氮(UUN)及24小时尿蛋白定量测定。(7)统计学方法所有数据资料采用(χ±s)表示,采用SPSS12.0统计软件处理。多组间均数经方差齐性检验后应用单因素方差分析。相关性采用PEARSON直线相关分析。结果:(1)实验大鼠肾间质纤维化病理变化:UUO术后6周,各组大鼠表现不同程度的梗阻侧肾脏肿大,肾实质变薄,肾盂肾盏扩大。光镜下观察手术对照组大鼠肾脏无明显病理改变,UUO组显示肾小管间质中炎症细胞增多,小管细胞呈现不同程度的变性、萎缩及坏死,小管周围肾间质增宽,YSH高、低剂量治疗组和贝那普利组表现部分肾小管轻度扩张,病变程度轻于UUO组,而各组肾小球均未见明显病理变化。(2)肥大细胞形态学特点和超微结构特征:甲苯胺兰染色和Tryptase染色结果显示,肥大细胞主要分布在肾间质血管周围,与UUO组相比,YSH高、低剂量治疗组和贝那普利组大鼠肥大细胞数量显著减少(P<0.05),透射电镜观察,UUO组脱颗粒的肥大细胞形状不规则,电子密度降低,着色不均匀,胞质中有空泡出现,膜表面微绒毛状突起增多,失去完整胞膜结构,YSH高、低剂量组和贝那普利组与UUO组相比,肥大细胞体积较大,未见颗粒脱出。(3)肾组织TGF-β1、α-SMA表达水平:UUO组和各治疗组TGF-β1、α-SMA表达均明显增多,与手术对照组比较有统计学意义(P<0.01);与UUO组相比,YSH高、低剂量治疗组和贝那普利组肾间质TGF-β1、α-SMA表达水平显著降低(P<0.05);YSH高剂量组与贝那普利组相比,差异无显著性(P>0.05)。(4)BUN、UUN、SCR、UCR及24小时尿蛋白定量结果:YSH高、低剂量治疗组和贝那普利组与UUO组相比,BUN、UCR和UUN差异具有显著性(P<0.01),YSH高剂量组与贝那普利组相比,差异无显著性(P>0.05),SCR及24小时尿蛋白定量在各组间均无明显差异(P>0.05)。结论:(1)YSH抑制UUO模型大鼠肾间质纤维化的作用与贝纳普利相似,并具有一定的改善UUO模型大鼠肾功能的作用;(2)研究表明UUO模型大鼠肾间质肥大细胞的浸润、功能状态与肾间质纤维化的严重程度有密切关系,而YSH可减少UUO模型大鼠肾间质肥大细胞的数量,超微病理显示具有抑制其脱颗粒的作用;(3)YSH抑制UUO术后肾组织中TGF-β1、α-SMA表达,提示YSH可能通过肥大细胞—TGF-β1—Smad途径发挥抗肾间质纤维化作用。