山楂是中国重要果树之一，果实含有丰富的营养物质，是鲜食与药用的上等补品，且山楂树冠整齐，花叶并茂是较好的观赏和绿化树种。生产上山楂虫害发生相当严重，造成产量和品质的损失。为害山楂的害虫主要是鳞翅目害虫，其中主要包括食心虫、木蠹蛾等，不但危害果实，还咬食叶片和树干等。一些优良的品种由于虫害的破坏，品种不断的退化，已濒临灭绝。由于在已有的种质资源中很难找到可用的抗虫材料，使山楂在抗虫方面的常规育种受到限制。植物转基因技术的广泛应用，使通过生物工程方法培育具有优良性状的果树新品种成为可能，本研究也运用这一技术开展了山楂组培与转基因研究。获得了大果山楂三个品种无菌试管苗，首次建立了辽红山楂叶片再生体系，并在此基础上，研究了农杆菌介导Bt基因转化的条件，获得了转基因植株。主要试验结果如下：1．无菌试管苗的获得从选择外植体开始，比较了单芽与带芽茎段在相同时间内HgCl₂灭菌的污染率、褐化率和死亡率，进而确定单芽为外植体更适合。单芽HgCl₂消毒7min为宜，污染少，萌发率高。根据外植体在不同培养基上的生长情况，确定MS为基本培养基。利用正交试验分析了辽红山楂试管苗伸长与增殖的激素浓度配比，确定了腋芽增殖培养基：MS+BA2.0+NAA0.02和继代培养基：MS+BA1.0mg/L+GA₃0.3m/L+NAA0.02m/L。2．辽红山楂生根试验进行了基本培养基与激素等影响因素的筛选试验，结果表明基本培养基1/2MS优于1/4MS，生长素IBA优于NAA，IBA和NAA配合使用的效果则更好，培养基中添加20g/L的蔗糖生根效果最佳。最佳的生根培养基为1/2MS+IBA0.6mg/L+NAA0.2mg/L+20g/L蔗糖+7g/L琼脂。3．辽红山楂叶片再生体系的建立3．1愈伤组织的诱导研究了基因型、暗培养时间、不同激素、培养基类型等因素对辽红山楂叶片愈伤组织诱导的影响。相同培养条件下，不同的基因型愈伤组织诱导差异很显著，辽红山楂的叶片愈伤组织诱导率最高；其次为秋金星；大旺最差，未诱导出愈伤组织。一定时期的暗培养是山楂叶片诱导的必要条件，暗培养5～9d与15～20d的愈伤组织在形态上有着明显的差异，暗培养7d最佳。BA及TDZ与NAA的组合都可以诱导叶片产生愈伤组织，但是由BA和NAA诱导的愈伤组织硬度大，颜色墨绿，易褐化，20天后大部分即己褐化死亡，而TDZ与NAA配比诱导的愈伤硬度相对较小，颜色翠绿，褐化程度较轻，比较适合再分化和继代培养，所以MS培养基比较适合辽红山楂叶片愈伤组织的诱导。辽红叶片愈伤组织诱导培养基为：MS+TDZ1.0mg/L+NAA0.05 mg/L。3．2愈伤组织再生不定芽以MS和WPM两种培养基上诱导的愈伤组织为材料，进行了再生不定芽比较试验，筛选出再分化培养基WPM+BA2.0mg/L+KT0.5mg/L+NAA0.02mg/L。通过Cef对辽红山楂愈伤组织再分化的影响以及无根试管苗对Kan抗性预备试验，基本上确定了遗传转化中抗生素最佳浓度为Cef500mg/L、Kan愈伤组织再分化和试管苗生长临界值分别为40mg/L和10mg/L。4．农杆菌介导Bt基因的转化建立了农杆菌介导山楂叶片愈伤组织转Bt基因体系，侵染菌液浓度为OD₆₀₀=0.6；侵染时间为7min，感染了上百块愈伤组织，但由于农杆菌侵染后再生频率太低，只获得3株抗性植株。