长链非编码RNA在胚胎型横纹肌肉瘤和急性T淋巴细胞白血病中的表达研究

来源 :南京医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:huyuxuan0601
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目的:在前期研究中,我们发现了一个全新的长链非编码RNA (Long non-coding RNA, LncRNA) T-ALL-R-LncRl,进一步的研究证明其与恶性肿瘤相关,并且具有促进肿瘤细胞生长的作用。而为了在治疗胚胎型横纹肌肉瘤(embryonal rhabdomyosarcoma, ERMS)中寻找新策略,我们通过检测T-ALL-R-LncRl在ERMS细胞株RD细胞及ERMS动物模型肿瘤组织中的表达情况,为今后ERMS的治疗拓展新方向。方法:1、通过体外培养RD细胞,获得处于生长对数期的RD细胞。2、取处于生长对数期的RD细胞并制成单细胞悬液,通过给BALB/c裸小鼠皮下注射RD细胞悬液的方法建立ERMS动物模型,细胞接种后观察并记录肿瘤生长情况,绘制肿瘤生长曲线。3、成瘤裸鼠于四周后脱颈处死,取瘤块行病理H-E染色观察肿瘤病理特征,同时行免疫组织化学检测Desmin、Myogenin、MyoD1及Myoglobin在肿瘤组织中的表达情况,确定肿瘤病理分型。4、通过RT-PCR方法检验T-ALL-R-LncRl在RD细胞及ERMS肿瘤模型肿瘤组织中的表达情况。结果:1、成功体外培养RD细胞,培养后获得处于生长对数期的RD细胞。2、接种RD细胞的裸鼠1周后全部出现肿瘤,成瘤率达100%。镜下观察肿瘤组织H-E和免疫组织化学切片,确定肿瘤组织病理分型为胚胎型横纹肌肉瘤。3、RT-PCR实验在RD细胞及ERMS动物模型肿瘤组织中发现T-ALL-R-LncRl,经测序确定为T-ALL-R-LncRl部分序列。结论:在RD细胞和ERMS动物模型肿瘤组织中发现T-ALL-R-LncRl的存在。成功建立的ERMS动物模型提供了稳定可靠的实验模型。这些结果也许为今后进一步研究ERMS的疾病分子机制、诊断及治疗提供了重要基础和依据。目的:观察长链非编码RNA (Long non-coding RNA, LncRNA)在人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株(Jurkat细胞)与正常人T淋巴细胞中的表达谱的差异。方法:1、体外培养Jurkat细胞株;2、用Ficoll人淋巴细胞分离液分离正常人单个核细胞(eripheral blood mononuclear cell, PBMC); 3、TRIzol法分别提取上述两种细胞总RNA,并通过变性琼脂糖凝胶电泳及紫外吸收测量法对RNA的质量进行检测;4、通过LncRNA芯片技术检测获得细胞中LnRNA表达谱差异;5、在对初始实验数据进行预处理和均一化后,筛选出差异表达的LncRNA进行生物信息学分析,选取具有生物学意义的LncRNA为后续实验提供理论基础。结果:1、体外成功培养Jurkat细胞株,并应用Ficoll分离法成功分离出PBMC;2、通过芯片检测,发现Jurkat细胞与正常人PBMC的LncRNA表达谱发生了显著的变化;3、此次实验共检测到了27086条LncRNA,将Jurkat细胞中LncRNA表达量与正常对照组进行对比后,共有11797条LncRNA发生改变,有4709条LncRNA表达上调大于两倍,其中表达上调超过10倍的有223条,有7089条LncRNA表达下调大于两倍,其中表达下调超过10倍的有764条,非差异表达LncRNA有15248条;4、通过对筛选出的LncRNA进行生物信息学分析,发现了部分具有潜在生物学功能的LncRNA,其中某些LncRNA可能与肿瘤性疾病如急性T淋巴细胞白血病具有重要的关系。结论:Jurkat细胞与正常人PBMC比较,LncRNA表达谱发生了显著的变化,通过生物信息学分析,得到了许多可能具有重要生物学功能的LncRNA,其中某些LncRNA与肿瘤性疾病的发生发展可能有着重要的联系,这为进一步研究急性T淋巴细胞白血病的发生、发展及疾病调控机制提供了理论依据。
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