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目的:辣椒碱(Capsaicin,CAP)是一种香草酰胺类生物碱,是辣椒中起辛辣作用的主要活性成分。辣椒碱在很多方面都起到很好的作用,包括镇痛、肥胖症、心血管以及胃肠道疾病、各种癌症、神经源性膀胱炎、皮肤用药等等。其中镇痛作用是最为独特的,其是通过影响5-羟色胺的变化以及耗竭神经肽P物质而起作用。这也是其与中枢镇痛作用和解热镇痛作用相区别的原因。同时辣椒碱无变态反应,无胃肠道反应,无成瘾性,具有很好的开发前景。但是由于其严重的肝首过效应,同时半衰期过短,目前临床上主要采取局部给药,但是这种给药方式会出现较严重的副作用,比如皮肤烧灼刺痛、瘙痒潮红、局部充血,有的甚至能引起神经炎症。近年来研究人员不断研究新的剂型,试图改善其局部给药副作用。在这个过程中研究人员发现,辣椒碱在体内半衰期过短的现状依然无法改善。因此我们迫切需要找到一种新剂型,来改善其现状。脂质体(Liposomes)是由磷脂和胆固醇组成,常用做药物载体。然而由于各种原因,普通脂质体的应用受到了限制。近年来,研究人员不断进行脂质体表面修饰的研究,希望能达到缓释药物、延长药物半衰期、减小刺激性、主动靶向、增加生理相容性等目的。目前常用的修饰剂包括:壳聚糖及其衍生物、聚乙二醇、半乳糖、聚乙烯醇、转铁蛋白、肽类等等。在这些修饰剂中,聚乙二醇的作用最为明显。将它加载到脂质体表面,能够明显延长药物在体循环时间,延长药物半衰期。因此,本课题将制备PEG修饰辣椒碱脂质体(PEGylated capsaicin liposome,PEGylated-CAP-Lip),延长辣椒碱的半衰期,为辣椒碱的进一步开发奠定基础。方法:采用薄膜分散-超声法制备PEG修饰辣椒碱脂质体(辣椒碱长循环脂质体),建立微柱离心法分离长循环脂质体和游离药物,分别考察柱床高度、离心转速对分离效果的影响;建立RP-HPLC法测定辣椒碱长循环脂质体包封率的方法;采用单因素实验逐个考察对辣椒碱长循环脂质体包封率有影响的处方及工艺因素,筛选出对包封率影响较大的因素,然后采用星点设计-效应面优化法优化处方,确定最优处方及制备工艺,进行验证及质量评价。采用溶出度仪分别考察辣椒碱溶液、辣椒碱脂质体(Capsaicin liposome,CAP-Lip)和辣椒碱长循环脂质体的体外释药行为,建立RP-HPLC法测定体外释放介质中辣椒碱浓度的方法,绘制累积释放率对时间曲线,并对结果进行模型拟合,探讨辣椒碱长循环脂质体的释药机制。大鼠尾静脉单剂量注射含相同药物量的辣椒碱脂质体及辣椒碱长循环脂质体,考察其药动学行为并比较半衰期。建立RP-HPLC-荧光法测定大鼠血浆药物浓度,绘制药时曲线,运用Kinetica 4.4.1软件进行相关药动学参数计算。考察辣椒碱长循环脂质体在不同温度及光照条件下脂质体的泄露率,并观察脂质体外观及性状等性质的变化。考察辣椒碱长循环脂质体的长期稳定性,为辣椒碱修饰脂质体的储存提供理论依据。结果:确定了微柱离心法分离脂质体和游离辣椒碱的条件。即柱高为1.1 m L,上样量为0.2 m L,洗脱液为0.2 m L PBS溶液(p H=7.4),两次离心转速均为2500 rpm,离心时间均为3 min,且第一次离心不加洗脱液。辣椒碱溶液、空白脂质体和脂质体中辣椒碱的柱回收率分别为98.07%、97.74%、100.2%,满足测定要求。建立了RP-HPLC法测定辣椒碱长循环脂质体包封率的方法,专属性强、稳定性好。采用薄膜分散-超声法制备辣椒碱长循环脂质体,单因素考察对长循环脂质体包封率有影响的处方及工艺条件,筛选出对包封率影响较大的3个条件,即药物与磷脂的质量比(X1)、磷脂与胆固醇的摩尔比(X2)和PEG-2000与磷脂的摩尔比(X3),采用星点效应面优化法进行优化,结果为:X1=0.05,X2=0.25,X3=0.08;其他条件固定为水化介质p H 7.4 PBS溶液,旋转蒸发速度为120 rpm,温度为50℃,水化时间为3 h,超声时间为4 min,超声功率为200 W。按最优处方制备得到辣椒碱修饰脂质体的包封率和载药量分别为76.45%、2.88%,平均粒径为120.2 nm。体外释放度结果显示,辣椒碱溶液的体外释放速度最快,在4 h释放即达到87.17%;辣椒碱脂质体和辣椒碱长循环脂质体的释放均较辣椒碱溶液缓慢,其中辣椒碱脂质体在19 h释放达到80.09%,而辣椒碱长循环脂质体在25 h释放才达到76.49%,表明辣椒碱长循环脂质体的体外释放速度较辣椒碱脂质体缓慢。模型拟合结果显示辣椒碱脂质体和辣椒碱长循环脂质体均较符合一级释放模型。采用RP-HPLC-荧光法测定大鼠血浆中辣椒碱浓度,方法专属性强、稳定性好。单剂量尾静脉注射辣椒碱脂质体及辣椒碱长循环脂质体,绘制其药时曲线,通过Kinetica 4.4.1软件分析,辣椒碱脂质体及辣椒碱长循环脂质体的消除半衰期分别为21.63±2.61 min,48.14±3.79 min,表明辣椒碱长循环脂质体较辣椒碱脂质体具有显著缓释作用。温度和光照对辣椒碱长循环脂质体的储存均有较大影响,在升高温度或者加强光照条件下,脂质体的泄露率显著提高,外观性状明显改变。长期实验结果表明,辣椒碱长循环脂质体在4℃避光条件,3个月的泄露率为22.19%,应在4℃避光条件下保存。结论:RP-HPLC法测定辣椒碱长循环脂质体包封率,专属性强、稳定性好;微柱离心法分离脂质体与游离药物,方法可靠,满足测定要求;星点设计-效应面优化法可准确筛选出最优处方;体内外实验表明,辣椒碱长循环脂质体较辣椒碱脂质体具有显著缓释作用;温度和光照对辣椒碱长循环脂质体的储存均有较大影响,制剂应在4℃环境下避光保存。