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目的（1）观察肥胖状态下LRG1表达水平的变化;（2）观察冷刺激对肥胖小鼠脂肪血管新生和LRG1表达水平的影响;（3）明确在诱导3T3-L1细胞成脂过程中LRG1表达水平的变化;（4）探索LRG1对人脂肪组织微血管内皮细胞的影响。方法1.第一部分:构建食源性肥胖模型:8周龄雄性C57BL/6J小鼠于恒温恒湿（30℃）动物饲养箱中,高脂饮食喂养16周。体重增长1.5-2倍则造模成功。2.动物分组及处理:60只8周龄的雄性C57BL/6J小鼠随机分成两组,普食组（n=10）和高脂组（n=50）。随机选取3只正常小鼠和造模成功的肥胖小鼠,提取脂肪组织通过胶原酶消化分离和免疫磁珠标记的方法分选出成熟脂肪细胞及内皮细胞,进行转录组测序。3.分子生物学分析:（1）RT-q PCR检测:提取脂肪组织RNA,检测LRG1的转录水平;（2）Western blot检测:提取脂肪组织蛋白,检测LRG1的表达水平。4.第二部分:构建冷刺激模型（梯度降温）:从第一部分中选取30只16周龄雄性C57BL/6J肥胖小鼠于恒温恒湿（30℃）动物饲养箱中,给予高脂饮食喂养。5.动物实验分组及处理:将肥胖小鼠随机分成三组,30℃对照组、4℃冷刺激组及-10℃冷刺激组,每组n=10。冷刺激组先置于16℃适应1周,然后经白天4℃、夜晚16℃适应三天后,4℃冷刺激组保持在4℃环境中持续4周。-10℃冷刺激组在4℃适应3天后经白天-10℃、夜晚4℃适应4天后,-10℃冷刺激组保持在-10℃环境中持续3周。-10℃冷刺激组的饮水每天更换3次,并加入雪霜保持湿润。30℃对照组置于30℃环境中,时间与冷刺激组保持一致。6.糖耐量及胰岛素耐量检测:罗氏血糖仪检测不同温度刺激下肥胖小鼠的空腹血糖,进行糖耐量（IPGTT）、胰岛素耐量试验（ITT）。7.体重、体长、摄食量、脂肪、肝脏重量测量冷刺激处理后测量小鼠体重、定时计算摄食量并记录数据,用直尺测量小鼠鼻端到肛门的距离为体长,取小鼠的i WAT、e WAT和肝脏称重并记录数据。8.血脂检测取不同温度刺激组小鼠血清检测血脂四项（TG、TC、LDL-C、HDL-C）。9.病理学检测对肝脏组织石蜡、冰冻切片分别进行HE染色、油红O染色;对脂肪组织石蜡切片进行免疫组织化学染色,检测脂肪组织CD31、LRG1的表达水平。10.分子生物学分析Western blot检测:提取脂肪组织蛋白,检测冷刺激下脂肪组织LRG1的表达水平。11.3T3-L1细胞处理:在诱导3T3-L1细胞分化为成熟脂肪细胞的过程中,从不同诱导时间点检测PPARγ、LRG1的转录及表达水平。12.人脂肪组织微血管内皮细胞（HAMECs）分组及处理:通过LRG1蛋白刺激HAMECs,观察细胞的成管能力,并检测正常情况下HAMECs的LRG1、Smad1/5/8的表达水平,然后干扰HAMECs上的LRG1观察Smad1/5/8的表达变化。结果1.与对照组相比,高脂组小鼠体重约为对照组小鼠体重的1.5-2倍,食源性肥胖模型构建成功。2.转录组测序结果显示,与对照组相比,肥胖小鼠i WAT中LRG1表达下调（p<0.05）,在成熟脂肪细胞变化比内皮细胞明显。3.转录组测序结果显示,与对照组相比,肥胖小鼠e WAT中LRG1表达下调（p<0.05）,在内皮细胞变化比成熟脂肪细胞明显。4.与对照组相比,肥胖小鼠i WAT和e WAT中LRG1表达水平降低（p<0.05）。5.与30℃组相比,4℃/-10℃组的肥胖小鼠体重、BMI和脂肪重量明显下降,摄食量增加（p<0.001）,且随着温度的降低,变化越明显（p<0.001）。6.与30℃组相比,4℃/-10℃组的肥胖小鼠脂肪组织UCP1的表达升高,且随温度的降低UCP1表达逐渐升高（p<0.001）。在i WAT变化比e WAT明显。7.IPGTT实验发现与30℃组相比,4℃/-10℃组的肥胖小鼠血糖调节能力明显增强（p<0.001）,且随着温度降低,变化越明显（p<0.001）。8.ITT实验发现与30℃组相比,4℃/-10℃组的肥胖小鼠胰岛素敏感性明显增强（p<0.001）,且随着温度降低,变化越明显（p<0.001）。9.与30℃组相比,4℃/-10℃组的肥胖小鼠血清中TG、TC、LDL-C、HDL-C水平降低（p<0.001）,且随着温度降低,TG水平下降越明显（p<0.01）,其余三项水平变化无明显差异。10.与30℃组相比,4℃/-10℃组的肥胖小鼠肝脏重量减轻（p<0.001）,脂质沉积减少。11.与30℃组相比,4℃/-10℃组i WAT和e WAT的血管生成指标CD31、LRG1免疫组化染色阳性（p<0.001）,且随着温度降低,阳性区染色越多（p<0.001）。12.与30℃组相比,4℃/-10℃组i WAT和e WAT的LRG1表达水平升高（p<0.05）。13.3T3-L1细胞诱导分化为成熟脂肪细胞的过程中,随着诱导天数的增加,PPARγ、LRG1的表达量逐渐升高,成熟脂肪细胞中表达量最高（p<0.001）。CEBPα表达水平先升高后降低。14.LRG1蛋白刺激能促进HAMECs的成管能力。在HAMECs中检测到高LRG1与Smad1/5/8磷酸化表达水平,且干扰LRG1的表达能抑制Smad1/5/8磷酸化水平（p<0.001）。结论1.肥胖状态下LRG1表达水平降低;2.冷刺激促进LRG1表达和脂肪血管新生,且有效减轻肥胖小鼠的体重、脂肪组织重量、增加进食量、改善血脂、血糖调节能力和脂肪肝;3.成熟脂肪细胞和HAMECs高表达LRG1;4.LRG1蛋白刺激能促进HAMECs的成管能力,且干扰LRG1的表达能抑制Smad1/5/8磷酸化水平;5.以上结果说明LRG1作为强效的内源性促血管生成因子,通过影响血管新生参与脂肪重构,并且可能通过调节Smad1/5/8磷酸化参与脂肪血管新生,此结论为促血管生成药物治疗肥胖提供新的靶点。