【摘 要】
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斑马鱼(Danio rerio)是一种热带淡水硬骨鱼,具有体型小、繁殖能力强、胚胎发育透明等优点。作为新型模式动物斑马鱼广泛应用于遗传学、肿瘤生物学、发育生物学和环境监测等诸多
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斑马鱼(Danio rerio)是一种热带淡水硬骨鱼,具有体型小、繁殖能力强、胚胎发育透明等优点。作为新型模式动物斑马鱼广泛应用于遗传学、肿瘤生物学、发育生物学和环境监测等诸多领域。近年来,斑马鱼在免疫学研究中的应用日益广泛,胸腺和头肾是斑马鱼重要的免疫器官和造血器官,其在组织学方面的研究逐渐受到重视。但是由于斑马鱼体型小,胸腺和头肾取材十分困难,迄今为止,胸腺和头肾形态学方面的研究相对滞后,相关的报道也很少。本研究从形态学角度阐述斑马鱼胸腺和头肾的组织结构、细胞的超微结构以及增龄性变化等。研究结果不仅为建立和丰富斑马鱼脏器的生理数据库奠定基础,还有利于推动实验动物结构特征的网络化共享。同时,对斑马鱼胸腺和头肾的正常组织形态学的研究,可以为相关的病理和毒理实验提供组织形态学参考。 试验Ⅰ斑马鱼胸腺的显微和超微结构 应用光镜观察斑马鱼胸腺组织结构,胸腺可分为皮质区和髓质区。皮质外区有数层扁平上皮细胞,皮质内区有大量的淋巴细胞,髓质区淋巴细胞数量少,网状上皮细胞数量相对较多。同时,观察到了黑色素巨噬细胞中心、肌样细胞、髓质上皮囊、血胸屏障、黏液细胞、脂肪组织等结构成分。根据不同日龄斑马鱼胸腺的形态学变化,分析了斑马鱼胸腺具体的退化方式。在透射电镜下,观察到淋巴细胞、细胞残体以及上皮细胞的内部超微结构。上皮细胞根据形态上的明显差异可以分为两种类型,Ⅰ型网状上皮细胞形状不规则,细胞器发达,胞体长,充分与周围淋巴细胞接触;Ⅱ型网状上皮细胞体积明显比淋巴细胞大,核大且位于中央。 试验Ⅱ斑马鱼头肾的显微和超微结构 应用光镜观察斑马鱼头肾组织结构,头肾实质外部有少量胶原纤维包裹。幼龄斑马鱼头肾内部呈模糊的网状,有大量的淋巴细胞和血细胞,少量颗粒细胞、甲状腺滤泡和滤泡上皮细胞。在1年龄的斑马鱼头肾中观察到了大量颗粒细胞和肾上腺细胞。通过免疫组织化学方法,比较不同日龄斑马鱼头肾中,造血干/祖细胞的数量差异,分析造血能力的变化。应用透射电镜观察到头肾中有巨噬细胞、嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞,两种颗粒细胞的增龄性变化明显,胞浆中,分别含有梭形和卵圆形的黏性颗粒。 试验Ⅲ斑马鱼胸腺和头肾的光镜和电镜样品制备 斑马鱼体型小,胸腺和头肾等器官取材困难。本章节就实验中斑马鱼胸腺和头肾的取材及处理方法进行详细描述,力图将斑马鱼相关器官的光镜和电镜样品处理程序化。研究内容包括透射电镜样品处理、染色,光镜样品处理、H-E染色、PAS染色和Gordon Sweets网状纤维染色。通过上述处理,取得了理想的观测结果。有利于使斑马鱼胸腺、头肾以及其他器官的形态学观测样品处理的操作标准化,为斑马鱼在环境监测等领域的广泛应用提供程序化的操作步骤。
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