Hsacirc0013958对卵巢癌的诊断效能及对其生物学行为的影响

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目的:卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一,死亡率居妇科肿瘤之首。很大一部分原因是早期卵巢癌症状十分隐匿,且无早期诊断标志物,待明确诊断时已进展为卵巢癌晚期,预后不太理想且易复发。当前卵巢癌的治疗方案主要为减瘤手术加新辅助化疗,但疗效仍不太理想,且易产生化疗耐药。因此,探索早期卵巢癌诊断标志物以及治疗靶点成为亟待解决的重要问题。CircRNA是一种新型的非编码RNA,它首次发现于RNA病毒中。由于它具有良好的稳定性和特异性,逐渐成为研究的热门方向。因此,探究circRNA对于肿瘤的发生、发展以及潜在的分子机制研究具有重要的临床意义。Hsacirc0013958位于1号染色体上,基因组长度为816,它由12-14号外显子连接成环。目前仅在非小细胞肺癌中作为miRNA-134的海绵而被报道,本研究以hsacirc0013958为主要研究对象,首次探讨其对卵巢癌的诊断价值以及对卵巢癌生物学行为的影响,希望对卵巢癌的诊疗提供新的思路。研究方法:运用qRT-PCR方法检测hsacirc0013958在正常卵巢上皮细胞、卵巢癌细胞、耐药细胞、45例正常卵巢组织及45例卵巢癌组织中的表达情况。绘制ROC曲线评估hsacirc0013958对卵巢癌的诊断效能,并计算出其最佳临界值的约等指数,灵敏度以及特异度。运用卡方检验,FISH精确检验分析hsacirc0013958与卵巢癌患者的临床病理生物学行为的关系。在卵巢癌细胞中沉默hsacirc0013958,采用CCK8实验,检测其对卵巢癌细胞增殖的影响。运用Transwell实验检测其对卵巢癌细胞迁移侵袭的影响,运用流式细胞仪检测其对卵巢癌细胞凋亡的影响。运用Western Blot实验检测卵巢癌中上皮间质转化相关蛋白(E-cadherin和Vimentin)及凋亡相关蛋白(Bax和Bcl-2)的变化情况。结果:Hsacirc0013958在卵巢癌细胞(SKOV3、A2780、OVCAR-3)中的表达量显著高于正常卵巢上皮细胞(P<0.05)。Has_circ_0013958的表达量在卵巢癌细胞SKOV3及卵巢癌耐紫杉醇细胞SKOV3-TR30中比较无显著性差异(P>0.05)。Hsacirc0013958在卵巢癌组织的表达量也显著高于正常卵巢组织(P<0.01),其在卵巢癌耐药与敏感组织中比较无显著性差异(P>0.05)。ROC曲线下面积为0.912(95%CI=0.854-0.969,P<0.01)。当最佳临界值为7.6435时,约登指数为0.711,敏感性为0.800,特异性为0.911。Hsacirc0013958表达情况与患者的FIGO分期(P=0.029)及淋巴结转移情况(P=0.005)密切相关,而与患者的年龄、绝经与否、肿瘤分化程度以及耐药情况均无关(P均>0.05)。CCK8实验结果表明,在卵巢癌细胞中沉默hsacirc0013958后,与空白对照组相比,沉默hsacirc0013958的卵巢癌细胞增殖能力明显下降。Transwell实验结果表明,在卵巢癌细胞中沉默hsacirc0013958后,与空白对照组相比,沉默hsacirc0013958的卵巢癌细胞迁移侵袭能力明显下降。流式细胞仪检测结果表明,在卵巢癌细胞中沉默hsacirc0013958后,与空白对照组相比,沉默hsacirc0013958的卵巢癌细胞凋亡率明显增加。Western Blot实验结果表明,在卵巢癌细胞中沉默hsacirc0013958后,与空白对照组相比,E-cadherin蛋白表达量增加,Vimentin蛋白表达量减少,表明沉默hsacirc0013958抑制了上皮间质转化,进而抑制了卵巢癌细胞的迁移侵袭,这与Transwell实验结果相一致。在卵巢癌细胞中沉默hsacirc0013958后,与空白对照组相比,Bax蛋白表达量增加,Bcl-2蛋白表达量减少。表明沉默hsacirc0013958后,卵巢癌细胞凋亡增加,这与流式细胞仪检测结果相一致。结论:1.Hsacirc0013958在卵巢癌细胞、组织中均高表达,其表达在卵巢癌敏感和耐药细胞、组织中均无显著性差异。2.Hsacirc0013958对卵巢癌具有较好的诊断效能。3.Hsa_circ0013958与患者的FIGO分期及淋巴结转移情况密切相关,与患者的年龄、绝经与否、肿瘤分化程度以及耐药情况无关。4.Hsacirc0013958促进卵巢癌细胞增殖、迁移以及侵袭,抑制凋亡。可能通过上皮间质转化以及凋亡相关蛋白影响卵巢癌细胞的生物学行为。
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