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目的:模拟新生儿窒息建立急性缺氧幼龄大鼠肠黏膜损伤模型,并用谷氨酰胺(Gln)、自噬抑制剂6-氨基-3-甲基嘌呤(3-MA)干预,检测小肠黏膜损伤模型中自噬相关蛋白Beclin 1、LC3-II的表达,观察Gln对急性缺氧致肠黏膜损伤幼龄大鼠肠黏膜上皮细胞的保护作用,探究Gln对急性缺氧所致损伤肠黏膜的保护是否与其影响的自噬水平改变有关。方法:将120只6日龄SD大鼠随机均分为A、B、C、D四个组,均由母鼠自由喂养。A组为模型对照组,B组为Gln组,C组为Gln+3-MA组,D组为3-MA组,每组30只。模型建立前30min分别给予A组、B组腹腔注1ml 0.9%生理盐水,C组、D组腹腔注3-MA(剂量为20 mg/kg,溶于1 ml生理盐水)。将6日龄乳鼠置于氧浓度为3%的简易缺氧箱中,氮气持续通气10min,流量为1.5L/min。模型建立后,B、C组Gln0.3g/kg(配比浓度为20g/L,生理盐水溶解)同时灌胃,之后每天定时等量灌胃Gln一次。各组在实验0、6h、24h、48h、72h时间点时随机选出6只幼龄大鼠心脏取血后立即断颈处死,迅速解剖乳鼠,观察小肠大体形态,取小肠组织标本。各时间点取出的血液室温下静置2h后离心(3000转,15min)取上清液,用ELISA法检测IL-1、TNF-α、HIF-1a的表达情况;将取出的小肠标本制备石蜡切片和HE染色,在显微镜下观察小肠黏膜病理变化;并且用免疫组化和蛋白免疫印迹法检测小肠组织中Beclin 1、LC3-II蛋白的表达情况;结果:1.小肠黏膜病理学改变:D组(3MA)肿胀程度最重,B组(Gln)最轻,A(对照组)、C(Gln+3MA)介于两者之间;HE染色显微镜下四组6h肠上皮结构开始出现病理性改变;24h时病理学改变最严重;48h时病理学改变渐减轻;72h病理损伤渐恢复;各时间点B组(Gln)病理评分低于与A组(对照组),D组(3MA)病理评分明显高于与A组(对照组),C组(Gln+3MA)病理评分高于B组(Gln)。2.血清中IL-1、TNF-α、HIF-1a的表达:四组血清中IL-1、TNF-α、HIF-1a在6h时浓度最高,24h开始下降,48h-72h逐渐恢复。除0h外,B组(Gln)各时间点IL-1、TNF-α及HIF-1a的表达明显低于A组(对照组),D组(3MA)IL-1、TNF-α及HIF-1a的表达明显高于A组(对照组)。C组(Gln+3MA)促炎因子IL-1、TNF-α及HIF-1a表达水平低于D组(3MA)。3.免疫组化法检测小肠组织Beclin 1、LC3-II蛋白的表达:除0h以外其余时间点四组LC3-Ⅱ、Beclin 1免疫组化评估值差异均有统计学意义(P<0.05)。各组内0h时Beclin 1、LC3-II在肠上皮细胞中表达极少,6h、24h表达增多,48h、72h表达量渐减低。除0h时外,D组(3MA)各时间点Beclin 1、LC3-II的染色弱于A组(对照组),平均光密度值低于A组(对照组);B组(Gln)各时间点Beclin 1、LC3-II的染色强于A组(对照组),平均光密度值高于A组(对照组);B(Gln)、C组(Gln+3MA)各时间点Beclin 1、LC3-II的染色强于D组(3MA),平均光密度值高于D组(3MA)。4.Western Blot法检测小肠组织Beclin 1、LC3-II蛋白的表达:除0h以外其余时间点四组Beclin 1、LC3-Ⅱ蛋白灰度比差异均有统计学意义(P<0.0001)。Beclin 1、LC3-II蛋白灰度值6h开始上升,24h后开始回落,72h渐恢复至基础水平。D组(3MA)与A组(对照组)比较,D组(3MA)小肠组织中LC3-II、Beclin 1表达少;各时间点B组(Gln)与A组(对照组)比较,C组(Gln+3MA)与D(3MA)组比较,小肠组织中LC3-Ⅱ、Beclin 1表达水平前者较后者高。结论:1、在氧浓度为3%环境下缺氧10min可造成幼龄大鼠肠黏膜上皮细胞损伤,小肠组织自噬相关蛋白Beclin 1、LC3-Ⅱ表达增多,应用自噬抑制剂3-MA后,自噬相关蛋白的表达减弱。2、Gln可使急性缺氧幼鼠血清中致炎因子IL-1、TNF-α降低,小肠黏膜病理损伤减轻,表现出保护肠上皮细胞的作用。3、Gln可促进急性缺氧所致幼鼠损伤的小肠黏膜自噬相关蛋白Beclin 1、LC3-Ⅱ的表达,其对受损肠黏膜的保护与Gln上调肠黏膜细胞自噬表达有关。