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目的:本研究基于Nrf2/Keap1信号通路探讨人参皂苷CK对Aβ寡聚体调控作用及对神经元保护作用。阐明CK对防治阿尔茨海默病(AD)分子机制作用,为临床人参防治AD提供理论支持和实验依据。方法:本研究分别从体外实验、细胞实验和动物实验探讨CK对Aβ配体结合及调节作用,对Nrf2/Keap1信号通路调控的影响。为明确CK防治AD提供理论基础。1体外CK对Aβ寡聚体调节作用通过OpenSPR技术检测CK对Aβ42配体靶向亲和作用,利用ThT荧光实验检测CK对Aβ寡聚体的调节作用,通过SDS-PAGE电泳实验验证CK对Aβ寡聚体的解聚作用,采用透射电镜观察CK对Aβ寡聚体抑制作用,利用分子模拟技术推测CK与Aβ结合区域与结合水平。2 CK对受损SH-SY5Y细胞保护作用采用CCK-8实验检测CK对受损SH-SY5Y细胞存活率的影响,通过ROS检测技术验证CK对受损SH-SY5Y细胞内氧化自由基的调节作用,利用Western blotting技术检测CK对Aβ的调节作用及对Nrf2/Keap1信号通路调控作用。3 CK对受损HT22细胞保护作用利用细胞实时监测技术监测CK对受损HT22细胞保护作用,通过MTT技术检测CK对受损HT22细胞存活率的影响,光学显微镜观察细胞形态,利用ROS检测CK对受损HT22细胞内自由基和荧光强度的调节作用,通过免疫荧光、Western blotting和RT-PCR技术观察CK对Aβ42和Nrf2细胞定位情况,检测对受损HT22细胞中Aβ和Nrf2信号通路调控作用。4 CK对AD模型小鼠保护作用通过水迷宫和跳台实验检测CK对AD模型小鼠记忆能力和学习功能的影响,利用试剂盒检测CK对AD模型小鼠脑组织SOD活性,MDA和GSH含量的影响,通过HE染色观察CK对神经元形态的影响,利用TUNEL法观察CK对AD模型小鼠神经元凋亡的影响,通过免疫组化、Western blotting和RT-PCR技术检测CK对AD模型小鼠脑组织Aβ调节作用和Nrf2/Keap1信号通路调控作用。结果:1 CK对Aβ寡聚体调节作用在体外CK能与Aβ42单体对接并在β-折叠结构域靶向结合,最佳构象对接的Ki值为4.51μM,CK能解离Aβ聚集体,减少四聚体和高分子量多聚体,抑制Aβ寡聚体的形成。2 CK对受损SH-SY5Y细胞的保护作用机制CK能提高受损SH-SY5Y细胞存活率(P<0.05,P<0.01),减少细胞内ROS的产生(P<0.05,P<0.01),下调APP和Aβ的表达(P<0.05,P<0.01),下调BACE1和PS1的表达(P<0.05,P<0.01),上调IDE的表达(P<0.05,P<0.01),上调Nrf2/Keap1信号通路的表达(P<0.05,P<0.01)。3 CK对受损HT22细胞的保护作用机制CK提高受损HT22细胞存活率(P<0.05,P<0.01),升高细胞生长曲线,减少HT22细胞内ROS的产生(P<0.05),上调SYP和PSD95的表达(P<0.05),维护神经元突触结构和功能,下调APP、BACE1和PS1的表达(P<0.05),上调IDE的表达(P<0.05,P<0.01),下调Aβ的表达(P<0.05),降低Aβ在神经元间的聚集,上调Bcl-2的表达(P<0.05,P<0.01),下调Bax和Caspase3的表达(P<0.05,P<0.01),促进Nrf2进入细胞核,上调Nrf2/Keap1信号通路的表达(P<0.05,P<0.01)。4 CK对AD模型小鼠的保护作用机制CK提高AD模型小鼠记忆功能和学习能力,提高SYP和PSD95的表达水平(P<0.05,P<0.01),提高AD小鼠脑内SOD活性和GSH含量(P<0.05,P<0.01),降低MDA含量(P<0.05,P<0.01),降低APP、BACE1和PS1表达水平(P<0.05,P<0.01),提高IDE的表达水平(P<0.05,P<0.01),降低Aβ的表达水平(P<0.05,P<0.01),提高Bcl-2的表达水平(P<0.05,P<0.01),降低Bax和Caspase3的表达水平(P<0.05,P<0.01),提高Nrf2/Keap1信号通路的表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:CK能与Aβ42单体β-折叠区域靶向结合,促进Aβ寡聚体解聚,降低Aβ在神经元之间大量堆积形成Aβ聚集态,激活Nrf2/Keap1信号通路传导,降低神经元Aβ诱导神经元过氧化损伤和毒性,抑制神经元线粒体凋亡,维护突触结构和功能,提高AD模型小鼠记忆功能和学习能力,为防治AD提供理论依据。