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目的:
利用磷酸钙制备PEG-SS-siRNA/CaP纳米复合粒子,对该颗粒进行形态学观察和粒径分析,并检测其siRNA包封率、血清稳定性和转染能力。
方法:
1.采用化学偶联的方法,用双硫键把聚乙二醇和siRNA进行连接,得到PEG-SS-siRNA偶联体(PEG-SS-siRNAconjugate)。接着,利用PEG-SS-siRNA来调节CaP晶体的生长而获得PEG-SS-siRNA/CaP二元复合纳米颗粒。
2.利用紫外分光光度计来测量纳米复合颗粒离心后的上清液,通过结果计算获得siRNA的包封率。
3.分别利用透射电镜(TEM)进行形态学观察和动态激光光散射(DLS)测量纳米复合粒子的粒径和粒径分布。
4.利用DLS来检测纳米粒子在DTT溶液中的粒径以及在含有牛血清白(FBS)细胞培养液中的稳定性。
5.利用荧光素活性分析对纳米粒子的转染效果进行评估。
结果:
制备了PEG-SS-siRNA/CaP纳米复合颗粒,通过透射电子显微镜观察和动态光散射测试,结果显示该纳米颗粒为结构紧密的规则球形,粒径分布范围较窄,平均粒径为94nm,多分散指数0.012。动态光散射结果还显示在还原性环境中,该纳米粒子粒径明显增加;在含有胎牛血清(FBS)的细胞培养液中,纳米粒子的粒径在6小时内基本不发生变化,大约6小时后开始增加,显示了较好的稳定性。通过与对照组的比较,荧光素活性分析结果显示出聚乙二醇-磷酸钙纳米复合颗粒对于siRNA具有较好的转染效率。
结论:
聚乙二醇磷酸钙纳米颗粒制备简单,所得到的纳米颗粒粒径小分布窄,生物相容好,能有效载送并智能地在细胞内释放siRNA。虽然还有很多特性有待探索和深入研究,此新型siRNA载体或将在基因载体的选择中占有重要的地位。