恩诺沙星是经喹喏酮改造后的衍生物,并且抗菌能力强,作为一种广谱高效的抗菌药物。随着氟喹诺酮类药物在兽医临床和水产养殖中的广泛应用,其残留的药物会在动物体内慢慢蓄积和积累,药物残留问题直接威胁到了人们的生命安全。目前,用于检测恩诺沙星药物残留的常用方法为高效液相色谱法,虽然该方法灵敏度较高,但操作复杂、分析时间长且成本高,不利于现场检测,满足不了市场的需求。胶体金免疫层析试纸条“简易、快捷、灵敏”是未来趋势发展的主要检测手段。本文通过研究影响恩诺沙星胶体金试纸条的多种因素,确定试纸条的制备流程和优化条件,主要实验结果如下:在100 m L 0.01%的氯金酸中,加入2.0 m L 1%柠檬酸三钠。采用磁力搅拌器加热,煮沸反应时间为10 min,转速为200 r/min条件下,可以制备出优质的胶体金。根据胶体金粒径经验公式,可以计算出胶体金的粒径大约为14.60 nm左右。胶体金标记抗体,蛋白最佳标记量为9.6μg/m L,最适标记p H为9.0。通过实验对试纸条层析条件的优化,确定恩诺沙星抗原最适浓度为2.0 mg/m L,二抗最适浓度为0.5 mg/m L,金标抗体最适稀释倍数为4。金标抗体最佳离心转速为11000 r/min、重悬液为0.01 mol/L p H=9.0的硼酸缓冲液(含0.1%BSA、1%蔗糖)时,重悬效果较好,无挂壁、死金现象出现;金标抗体稀释液为p H=7.4、0.01 mol/L PB、1%BSA含有5%的蔗糖和0.02%的叠氮钠。对不同材质材料的对比研究,最终选择吸水垫型号为H5072、NC膜型号为Millipore180、金标垫选择型号为Ahlstrom8964及样品垫型号GL-b02。试纸条的性能检测,试纸条的灵敏度为60 ng/m L;试纸条对ENR具有很好的特异性,环丙沙星、诺氟沙星、沙拉沙星及磺胺嘧啶、氯霉素对恩诺沙星免疫胶体金试纸条检测均无明显干扰;试纸条可在4℃下密封保存4个月,试纸条的稳定性能较好。通过样品前处理的优化和实际样品的检测,能检测出16μg/kg的阳性样品,对恩诺沙星残留的现场快速检测具有重大的现实意义。