创伤后应激障碍(post-traumatic stress disorder，PTSD)是指个体由于经历对生命具有威胁的事件或严重的创伤，导致系列精神症状长期持续的精神障碍。PTSD症状主要表现为对创伤事件的病理性重现、对创伤相关线索的回避、持续性的高唤醒，以及对创伤经历的选择性遗忘和情感麻木。　　反复发生的闯入性体验创伤事件和不自主地反复回想是PTSD最具特征性的症状，但目前关于这一病理性记忆增强的神经和分子机制尚不明确。对人和动物的研究表明杏仁体、海马与内侧前额叶皮层是与PTSD相关的三个关键脑区，它们之间的交互作用可能是PTSD发生及保持的神经基础。最近有研究认为海马-杏仁核间神经联系的突触效能长时程增强（Long-term potentiation，LTP）可能是应激导致焦虑的神经基础，也是条件性恐惧的神经基础。　　蛋白激酶Mzeta(protein kinase Mzeta, PKMζ)是非典型蛋白激酶C(protein kinaseC，PKC)的亚型，只在脑中表达（尤其是海马和新皮质），多方面的证据表明PKMζ在记忆的维持和LTP中有重要作用。有报道称PKMζ通过调节GluR2依赖的α型氨基羟基甲基恶唑丙酸（α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxa-zolep-propionate receptors，AMPA）受体突触后膜运输来维持海马、新皮质及杏仁体的长期记忆，杏仁体PKMζ失活将损伤大鼠的恐惧记忆，并且记忆损伤程度与突触后膜GluR2减少成正相关。　　神经元PAS结构域蛋白4(neuronal PAS domain protein4，Npas4)是大脑特有的活动依赖性转录因子，Npas4调节多种基因表达，如即早基因、转录因子、孔道蛋白、酶以及调节突触功能的泛素化、运输、内吞作用等涉及的信号通路基因。Npas4对神经元的诱导作用短暂且具有选择性，主要发生在兴奋性神经元，Npas4在海马神经元促进突触的形成和成熟，有一部分依赖于AMPA受体的活性。　　基于以上理论，我们提出如下研究问题:1）PTSD大鼠模型中，海马PKMζ与Npas4的表达是否发生变化？2）PKMζ调节GluR2依赖的APMA受体突触后运输是否是引起PTSD症状的分子机制之一？Npas4是否参与这一调节过程？3) PKMζ-AMPA通路是否可以作为PTSD大鼠行为学异常的治疗靶点？　　由于伦理学和实验方法的限制，动物实验是研究PTSD病理性记忆增强的神经和分子机制的较好替代方法。在众多动物模型中，单程长时应激(singleprolonged stress，SPS)模型能使动物表现出PTSD的临床症状和神经内分泌改变，是目前公认的较好PTSD动物模型。　　本实验通过SPS制作PTSD大鼠模型，背侧海马注射ZIP，利用行为学检测评估背侧海马注射ZIP对PTSD相关抑郁和焦虑症状的效果;通过检测大鼠海马GluR2的运输及Npas4表达情况来评估PKMζ失活与GluR2运输及Npas4表达的影响，从而分析PKMζ影响GluR2运输及Npas4表达变化是否参与PTSD发生发展的病理生理过程，力争为PTSD防治提供新靶点奠定理论和实验基础。　　实验方法：　　本实验利用SPS方法制作PTSD大鼠模型，将PTSD模型大鼠分为1d、3d、7d、14d组，对照组为正常饲养大鼠，通过免疫组织化学染色、Western Blot、RT-PCR等方法检测海马PKMζ、Npas4蛋白及mRNA的表达变化;另外，将大鼠分为SPS+saline、SPS+ZIP、Unstressed+saline、Unstressed+ ZIP组，通过强迫游泳试验、旷场试验、高架十字迷宫试验等行为学检测评估背侧海马注射ZIP对PTSD相关抑郁和焦虑症状的影响;通过免疫组织化学染色、Western Blot、RT-PCR等方法检测海马Npas4蛋白及mRNA的表达变化;以含BS3的人工脑脊液进行脑片培养，通过Western Blot检测BS3结合GluR2及未结合BS3的GluR2的表达变化。　　实验结果：　　1、免疫组织化学染色结果　　免疫组织化学染色结果显示:SPS7d组及SPS14d组大鼠海马PKCζ和PKMζ表达显著高于对照组。　　2、行为学检测结果　　强迫游泳试验结果:和对照组相比，SPS7d、SPS14d组大鼠不动时间显著延长，表明SPS7d、SPS14d组大鼠有明显抑郁症状;背侧海马注射ZIP显著降低SPS大鼠抑郁样行为（不动时间百分比）;　　旷场试验结果:和对照组相比，SPS7d、SPS14d组大鼠中心停留时间、在中心运动的距离显著减少，表明SPS7d、SPS14d组大鼠有明显焦虑症状;背侧海马注射ZIP显著降低SPS大鼠焦虑样行为;　　高架十字迷宫试验结果:和对照组相比，SPS7d、SPS14d组大鼠在开放臂停留时间和进入开放臂次数显著减少，表明SPS7d、SPS14d组大鼠有明显焦虑症状;背侧海马注射ZIP显著降低SPS大鼠焦虑样行为。　　3、Western Blot结果　　Western Blot结果显示:SPS7d组、SPS14d组大鼠海马PKCζ和PKMζ蛋白表达显著高于对照组;SPS1d组、SPS3d、SPS7d组大鼠海马Npas4蛋白表达显著低于对照组;SPS+ZIP组大鼠海马Npas4蛋白表达显著高于SPS+Saline组。SPS+ZIP组大鼠海马BS3结合GluR2蛋白表达显著低于SPS+Saline组。　　4、RT-PCR结果　　RT-PCR结果显示:SPS7d组、SPS14d组大鼠海马PKCζ和PKMζ mRNA表达显著高于对照组;SPS1d组、SPS3d、SPS7d组大鼠海马Npas4 mRNA表达显著低于对照组;SPS+ZIP组大鼠海马Npas4 mRNA表达显著显著高于SPS+Saline组。　　结论：　　1、SPS方法制备PTSD模型大鼠在刺激后7天和14天海马PKMζ蛋白及mRNA表达水平显着增高。背侧海马注射ZIP致PK Mζ失活有效缓解大鼠PTSD相关症状。　　2、PTSD大鼠在应激后3天和7天，海马Npas4表达降低，在应激后14天恢复正常;背侧海马注射ZIP使Npas4表达水平显著增高。背侧海马注射ZIP影响GluR2运输，使细胞膜上GluR2显著降低。