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第一部分 CD40分子在肺癌中的生物学意义 目的 分析CD40分子及突变型p53和癌基因C-raf-1在肺癌中的表达及其与临床的相关性；测定可溶性CD40分子(sCD40)在正常人、肺癌患者的血清和良恶性胸腔积液中的含量，探讨sCD40在肺癌、胸腔积液鉴别中的生物学意义：在体外观察激发型CD40单克隆抗体(5C11)和人重组CD40配体(rhCD40L)在与CD40相互作用后对肺癌细胞(CD40阳性、阴性细胞)的生长、增殖、细胞周期和凋亡的影响以及肺癌细胞表型的变化，从而探讨CD40信号在肺癌中作用和可能的机制。 方法 外科手术切除标本51例，采用免疫组织化学法检测不同类型肺癌组织中CD40分子及其突变型p53和癌基因C-raf-1的表达，分析CD40、P53和C-raf-1表达水平与临床和病理的相关性；同时用免疫荧光标记和流式细胞仪测定10例新鲜肺癌细胞和4株肺癌细胞株(SPC-A-1、H460、A549和H446)膜表面CD40CD4O信号在人肺癌中的作用及其在免疫治疗中的运用研究中文摘要分子的表达率;ELISA方法测定可溶性CD4O(SCD40)分子的含量;为了研究CD4o分子在肺癌中的作用，采用激发型CD4o单抗(5Cll，10p创ml)和人重组CD40配体(rhCD40L，2协g/ml)，与肺癌细胞株在体外共育，观察了肺癌细胞表型、细胞周期和凋亡变化;采用细胞计数和3H一TdR掺入法测定肺癌细胞的生长及增殖。 结果1、CD4O分子大多表达于细胞膜，以出现棕黄色染色细胞为阳性细胞，正常肺组织不表达CD40，肺癌细胞中的阳性表达率为76.5%(39巧l)，过度阳性表达率54.9%(28/51)，在临床分期中，以111期83.3%(15/18)和IV期75%(3/4);病理分级中3级61.5%(l6/26);有淋巴结转移72.7%(24/33);组织类型中鳞癌700/0(14/20)、大细胞癌62.5%(5/8)的比例最高。2、cD40在肺癌组织中的阳性表达率为76.5%，强阳性表达率为54.9%。CD40强阳性表达与肿瘤临床分期和淋巴结转移有显著的相关性沙<0.05)，而与肺癌的病理组织学分级及病理类型无明显相关勿>0.05);经免疫荧光标一记和流式细胞仪分析表明，CD40在肺癌细胞株的细胞中有不同程度的表达(2.0%一88.2%)，其中阳性表达株占75%，最高表达株是H460，达882%。而在10例新鲜肺癌组织中，表达率为1 .6%一71 .0%，阳性表达也占70%，该结果与免疫组织化学法和细胞株分析相一致。3、p53阳性为细胞核内棕黄色染色颗粒，在肺癌组织中的阳性表达率为74.5%(38/5l)，强阳性表达率45.1%(23/5l)，p53强阳性表达与肺癌局部淋巴结转移有关勿<0.05)，但与病理类型、分级和临床分期无关勿>0.05);4、C一raf-1阳性为细胞浆呈棕黄色染色，在肺癌组织中的阳性表达率为68.6%(35/51)，强阳性表达率53.0%(27/5l)。C一raf-1强阳性表达与病理类型、分级和临床分期无关切>0.05)。5、C一raf-1表达与CD4o、p53的表达无明显的相关性，>0.05)，但CD40与p53表达呈正相关CD4O信号在人肺癌中的作用及其在免疫治疗中的运用研究中文摘要(P<0.05);6、健康供血员血清中sCD4o为116.25士18.72pg/ml，健康体检者为117.52士17.8pg/ml，肺癌患者血清中sen4o为623.23士lso.69pg/ml，明显高于正常人印<0.01)，但与肿瘤的分期、病理类型无关。良性患者血清中sCD40分别为656.37士304.92pg/ml，与肺癌患者血清中scD40相比两者无明显差异。良性胸腔积液中sCD40为1620.48士508.93pg/ml，其中结核性胸腔积液为sCD40为1916.45士596.27pg/ml，恶性胸腔积液中sCD4o为820.24士Zoo.Zopg/ml，明显低于结核性胸腔积液(P<0.01);7、CD40阳性的肺癌细胞在抗eD4o抗体和rhCn40L激发后，其生长曲线和3H一TdR掺入试验提示肿瘤细胞增殖和生长受抑，其表面分子FasL、ICAM、TNFRI上调性表达，而TNFRll表达下降。并引起肿瘤细胞的细胞周期发生改变，72小时后出现的改变为:细胞周期阻滞Gl期，进入S期细胞明显减少，从而引起肿瘤细胞生长受抑;CD40阴性表达的肺癌细胞株则无明显改变;8、诩Fa与肺癌细胞共育(long/ml和25ng/ml)24小时后对肿瘤细胞周期无明显影响勿>。.05)，但72小时后阻止细胞从G期进入S期，10ng/ml和25ng/ml浓度结果相似;9、thCD40L和TNFa在体外联合作用于培养的肺癌细胞，可使CD40阳性肺癌细胞的生长明显受抑制伊<0.05)。 结论1、cD40分子在肺癌组织中表达率为76.5%，p53在肺癌组织中的阳性表达率为74.5%，C一raf-1在肺癌组织中的阳性表达率为68.6%，发现CD40分子和p53的强阳性表达可能对肺癌预后的判断及淋巴结转移监测的有价值，同时我们的实验还表明CD40与p53基因表达有着密切的相关性，其意义有待进一步探讨:2、结核性胸腔积液中sCD40含量较之恶性胸腔积液明显升高，提示可溶性CD4O的升高可能反映了CD4O分子参与了机体的免疫应答过程，并可能成为结核性和恶性胸腔积液鉴别的指标之一。3、应用激发型抗CD40单抗(SCll)、CD40信号在人肺癌中的作用及其在免疫治疗中的运用研究中文摘要人重组CD40配体(rhCD40L)与CD40分子交联和配基化后，在体外对CD40阳性的肺癌细胞生长和增殖有显著的抑制作用，作用机制主要是由于限制肺癌细胞进入细胞周期所致，据此提示CD40分子激发尤其是交联作用具有抑制肿